病毒失去感染性,称为灭活。了解灭活的条件不仅对从患者分离病毒、防腐和消毒是必要的,而且和疫苗生产也有关系。病毒灭活的机理有三。
一、破坏包膜:包膜含有脂类物质,因之有包膜的病毒可迅速被脂溶剂破坏,如或去氧胆酸钠可使病毒灭活。实际上可利用病毒对脂溶剂的敏感性来检查病毒是否有包膜。物理因子,如渗透压改变、冻融、热和干燥等都可引起包膜破坏。一般认为,呼吸道感染的病毒对于燥抵抗力弱,传播主要是人间直接感染,这是因为有包膜的原故。
二、病毒蛋白质变性:能使蛋白质变性的化学制剂都能使病毒灭活,加热引起变性也是有效灭活的方法。一般说病毒对热抵抗力弱,60℃几分钟就使之感染性明显降低,因此在分离病毒时,从患者取来的标本需低温保存,迅速送往实验室,长期保存要置于-80℃以下的低温条件。
三、病毒核酸的损害:、γ线等电离可切断核酸,紫外线可使核苷酸链上相邻的嘧啶碱基形成二聚物,而破坏病毒基因的功能。另外吖啶橙或中性红等染料可与病毒核酸结合,暴露于光线之下,可使核酸分解,而使病毒灭活。
病毒蛋白质变性,能使蛋白质变性的化学制剂都能使病毒灭话,如次氧化物、酸和辅等。加热引起变性也是有效灭话的方法。一般说病毒对热抵执力弱,几分钟就使之感染性明显降低,因此在分高病毒时,从患者取来的标本需低温保存,迅速送往实验室,长期保存置于-80C以下的低温条件。
病毒灭活试验器材:
1、试验用病毒株:脊髓灰质炎病毒1型(poliovirus- I,PV- I );疫苗株;艾滋病病毒1型(HIV-1)美国株。
2、宿主细胞:可采用VERO细胞系、BGM细胞、Hela细胞系或FL、细胞系,作为PV-1的测试细胞。用含有人T淋巴细胞白血病病毒1型(human T cell leukemiavirus 1, HTLV-1)基因的人淋巴细胞(株)作为HIV-1的测试细胞。
3、细胞培养瓶与96孔培养板。
4、恒温水浴箱。
5、二氧化碳培养箱。
6、层流超净工作台。
7、低温冰箱(-20°C, -80°C)。
8、液氮罐。
9、倒置显微镜。
10、离心机。
11、可调移液器及配套一 次性塑料吸头。
12、细胞维持培养基。
13、细胞完全培养基。
14、去离子水。
消毒:消毒是指杀死病原微生物、但不一定能杀死芽孢的方法。通常用化学的方法来达到消毒的作用。用于消毒的化学药物叫做消毒剂。