病毒灭活试验病毒悬液的制备:
1、从液氮中取出冻存的试验用宿主细胞,在37°C温水中迅速融化,用毛细吸管移植于含有细胞维持液的细胞管内,吹吸数次,使混匀,立即离心(3000r/min, 3min) ,去上清液。再加入适当的细胞维持液,吹吸数次,使混匀,同上离心后,转种于加有10完全培养基的培养瓶中。逐日观察细胞生长情况,在细胞长满单层时,用于消毒试验。
2、取出低温冻存的试验病毒毒种,37°C水浴融化,用细胞维持液作10倍稀释,然后接种于已经长满单层细胞的细胞瓶内,置37°C温箱中,使与细胞吸附、生长。逐日观察病变,待3/4细胞出现病变时,收获病毒。
3、将含有病毒及宿主细胞的培养液,在冰浴条件下,用超声波(或反复冻融)破碎宿主细胞,释放病毒。然后,尽快离心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要为细胞碎片),上清液即为所需的病毒悬液。按每管1. 0分装于无菌离心管(1.5)中。
4、取1支病毒悬液,按病毒滴度测定法,测定其病毒滴度。其余均冷冻保存于-80°C备用。
病毒灭活试验适用范围:主要适用于消毒产品或日常监测。用具有一定代表性的、活的病毒及其细胞感染技术,评价各种用途的消毒因子对测试病毒的杀灭效果。按此方法进行的试验,只是对消毒因子的灭活病毒能力的重要方面进行验证。
病毒灭活滴度计算方法:终点稀释法病毒感染滴度的计算以半数细胞感染剂量(TCID5o) 表示。TCID5o 的对数值计算公式如下。
TCID5o对数值=病变率高于50%组稀释度的对数值+距离比例(“病变率高于50%组”是指病变率超过50%的组,下简称“高于50% 组”;“病变率低于50%组”是指病变率低于50%的组,下简称“低于50%组”)。
消毒:消毒是指杀死病原微生物、但不一定能杀死芽孢的方法。通常用化学的方法来达到消毒的作用。用于消毒的化学药物叫做消毒剂。