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关 键 词：苏州病原DNA提取
行 业：化工 化学试剂
发布时间：2022-10-12
体液病原DNA提取试剂盒（磁珠法）适用于多种生物体液样本（如肺泡灌洗液、痰液、脑脊液等）及拭子样本的微生物DNA提取，可兼容上游经过去宿主核酸流程的样本。
体液病原DNA提取试剂盒组成成分：
1、裂解液DLB；
2、去蛋白液RE；
3、漂洗液WB；
4、洗脱缓冲液EB；
5、吸附柱AC；
6、收集管。
体液病原DNA提取试剂盒的操作步骤：
1、200μl血清等体液（需回复到室温，不足可用0.9%NaCl或者PBS补足）转入上述1.5ml离心管，加入400μl裂解液DLB，立刻涡旋振荡充分混匀。
2、室温(15-25℃)放置10分钟，每隔5分钟，振荡混匀一次。
3、加入450μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境高于25℃，乙醇需要冰上预冷后再加入。
4、将上述混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。如果总体积超过750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱AC中。
5、加500μl去蛋白液RE，12000rpm离心30秒，弃废液。
6、加入500μl漂洗液WB，12000rpm离心30秒，弃废液，加入500μl漂洗液WB，重复一遍。
7、将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8、取出吸附柱AC，放入一个新的离心管中，在吸附膜的中间部位加30-50μl洗脱缓冲液EB（事先在65－70℃水浴中加热效果更好），室温放置1分钟，12,000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，12,000rpm离心1分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要的DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是至小体积不应少于20μl，体积过小降低洗脱效率，减少DNA产量。
9、DNA可以存放在2-8℃，如果要较长时间存放，可以放置在－20℃。
体液病原DNA提取试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的DNA。无需使用氯仿等抽提，特有的缓冲液/蛋白酶K体系能迅速裂解病毒，使病毒蛋白与DNA分离，在蛋白酶K的作用下降解病毒蛋白，在高盐状态下将DNA选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除蛋白等杂质，然后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的DNA从吸附柱膜上洗脱下来。
体液病原DNA提取试剂盒使用事项：
1、样本体积不足200ul可以加入0. 9% NaC1补足。
2、为确保样本有效裂解，加入BufferGB后，需将样本与Buffer GB充分混匀。
3、如果环境温度超过25"C，无水乙醇应在冰上预冷后使用。
4、Buffer GD中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发。
5、如需进一步提高DNA 纯度，可重复步骤一次。Buffer PW中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发。
6、为增加洗脱效率，可将洗脱液在50~60C预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0~8.5之间，为了增加DNA回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2min，再次离心收集。
体液中病原dna的提取步骤中，去污剂用于破坏细胞或病毒蛋白外壳或膜结构，使核酸游离到溶液中，胍盐或盐用于变性蛋白质，释放其结合的核酸并促进核酸与硅基质膜或磁珠结合，同时也具有裂解病毒外壳或膜结构的功能，如果使用溶剂，也可以破坏细胞结构，变性蛋白质进而释放核酸。
体液病原DNA提取试剂盒保存条件：常温运输和保存，长期放置时（1月以上）应该放4℃。且具有挥发性，使用后需要将瓶盖拧紧。
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