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该过程控制在1min内完成,(zui好有压力控制装置,如果没有,zui好采用吊瓶,瓶的悬挂高度应通过动物血压的厘米水柱数值估计,小鼠、大鼠等一般挂在高于动物身体1,5m处,停止盐水灌注,通过三通管换用固定液继续灌注(室温),初始速度与盐水一致;当动物开始强烈抽搐后,降低流速,透射电镜从输液器胶囊观察窗看,维持每秒2滴,(10)常规手术取材、切割标本,浸泡固定30min后转入4℃冰箱过夜(此步骤同普通组织取材)。
请保证固定液量充足,固定液和组织的体积比不小于20:1,组织尺寸和容器关系(只装一个的参考标准):透射电镜芝麻到绿豆大小(如小鼠肾上腺):请用1,5mlEP管;,黄豆大小(小鼠肾脏):请用5ml离心管;,铺展面积类似蚕豆大小的组织片:请用平底的25ml广口瓶;,zui好刮取细胞,收集在离心管中,1000rpm离心5~10min(初次离心参数可按自己的经验调整,目的是不损伤细胞结构的情况下去掉培养液成分)。
生物样品TEM各实验步骤要求,取材和预固定,透射电镜动物普通组织,一般动物组织的取材,要点一是减少缺血缺氧时间,二是减少机械损伤,麻醉或断颈处死均可,可根据实验目的和条件选择,具体如下:请尽快用戊二醛固定液预固定,如图5所示,对图片做选取傅里叶变换,选择第二种校正方法,出现的变换结果中,选种对应的变换对称点,点击ok,出现的对话框中,填入对应晶面的1/d数值,并将单位改为1/nm,点击ok即可。