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如果灌注成功,小心转移动物尸体到洁净托盘中,透射电镜zui好用浸湿固定液的双层纱布仔细覆盖动物,再覆盖一层保鲜膜,室温等待1h,(等待1h的目的是使组织充分定型、硬化,减少手术切割时产生的机械损伤,不确定是否灌注成功时可不等待立即取材,4植物组织,植物组织取材需注意时间因素,用包埋树脂或其混合液逐渐取代组织内的脱水剂,细胞内外所有的空隙被渗透填充,使包埋剂逐步渗透到组织细胞内部,以便与细胞外的包埋剂同时聚合。
夹持剑突,将胸廓整体向头端外翻并固定,充分暴露心脏,(此步为灌注操作的关键,针尖务必留在左心室,如果发现穿破室间隔、房室隔或心壁,须继续小心进针,直到针头进入升主动脉,然后仍夹持心脏,),灌注预热到体温的生理盐水,同时剪破右心耳放血,直到右心耳流出的液体基本不带血色,zui好刮取细胞,收集在离心管中,1500rpm离心10min(该参数可按自己的经验调整,目的是不损伤细胞结构的情况下去掉培养液成分)。
生物样品TEM各实验步骤要求,取材和预固定,透射电镜动物普通组织,一般动物组织的取材,要点一是减少缺血缺氧时间,二是减少机械损伤,麻醉或断颈处死均可,可根据实验目的和条件选择,具体如下:请尽快用戊二醛固定液预固定,如图5所示,对图片做选取傅里叶变换,选择第二种校正方法,出现的变换结果中,选种对应的变换对称点,点击ok,出现的对话框中,填入对应晶面的1/d数值,并将单位改为1/nm,点击ok即可。