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透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边.集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
结果评判:调亡细胞体积变小,细胞质浓缩。调亡I期( pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象( cavitati)的空泡结构; IIa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生调亡小体。
透射电镜自噬小体检测
胰酶消化,收集作用后的细胞,细胞培养,离心,先将细胞块固定在2.5%成二醛和0.1%的PBS溶液中保存在4C中过夜。
再用乙醇梯度脱水,接下来用环氧树脂浸透并切成薄片。随后超薄切片用铜网固定,后用重金属醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色。通过TEM分析凋亡细胞内超微结构变化,拍照保存。
贴壁细胞:先倒出培养液,采用胰蛋白酶消化或者用细胞刮(会产生碎屑)刮下:带培养液进行离心,100-1500/mim 5 10min。离心完毕倒出培养液。管底的细胞团不要打散, 沿管壁倒入适量(一般为材料体积的5-10倍)的2.5-3.5%成醒固定液,河北细胞,固定约1h-2h. 也可在4C冰箱过夜。
细胞分化
细胞分化是指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程,其结果是在空间上细胞产生差异,在时间上同一细胞与其从前的状态有所不同。细胞分化的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达,通过不同基因表达的开启或关闭,终产生标志性蛋白质。细胞诱导是指将一群不同类型或者形态结构、功能特征存在差异的细胞通过生物学、物理学等手段,将之转变为具有相似/相同形态结构、功能特征的细胞群体的过程。