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细胞生物学服务
南京英瀚斯生物科技公司自建有标准的细胞培养房,配备有生物安全柜、超净工作台、细胞三气培养箱、二氧化碳细胞培养箱、荧光倒置显微镜、体视镜、、流式细胞仪等设备。细胞组技术人员毕业于东南大学、华中科技大学等高校生物学相关,具有硕士研究生以上学历,熟练掌握细胞学相关实验,淮安细胞,可开展多种细胞实验。动物实验外包选英瀚斯生物科技有限公司。
yao物对细胞的IC50检测
IC50 (half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。它能指示某一yao物或者物质(yi制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质,细胞增殖,比如酶,细胞受体或是微生物)的半量。在凋亡方面,可以理解为一定浓度的某种药wu诱导肿liu细胞凋亡50%,该浓度称为50%抑制浓度,即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度,IC50值可以用来衡量yao物诱导凋亡的能力,即诱导能力越强,该数值越低,当然也可以反向说明某种细胞对yao物的耐受程度。
成纤维细胞分离方法
1.处死孕鼠,全身置于75%酒精里浸泡,然后在超净台中用剪刀和镊子将孕鼠皮肤剪开,用另外- -组剪刀、镊子剪开腹部肌层,露出,后用第三组剪刀和镊子将小心取出放在盛有D-PBS的玻璃平皿中,冲洗去血。
2.用两把弯镊子将胚胎外的胞膜小心去除,然后夹掉头和内脏,将其余胚胎转移到一个装有30 ml D-PBS的50 ml离心管中,轻轻颠倒两次,倒掉D-PBS,再重复此步骤一次,注意要留少许D-PBS,然后将胚胎转移到另- -装有D-PBS的平皿中,并用手术刀片将其细细切碎。
3. 用200 μ的移液反复、快速地吹打平皿中的液体,转移至15 ml离心管中,于4C 1500 rpm离心5分钟,倒掉上清,以10 ml胰酶重悬沉淀,放在37C水浴中消化30分钟,且每隔五分钟轻轻晃动,使之充分消化。
4.将上层细胞悬液倒入一个装有10 ml MEF生长培养基的50 ml离心管中,用200目的尼龙网过滤后,以1500 rpm离心5分钟收集细胞,再用30 ml MEF生长培养基洗涤两次。
5.细胞沉淀用15 ml MEF生长培养基重悬后进行细胞计数(- -般8只14天的胎鼠可获得2-3x107细胞)。
6. 3x106细胞悬浮于15 ml MEF生长培养基中,接种到200 ml培养瓶中。
7. 24小时后更换新鲜的MEF生长培养基。
8.细胞长满后,单细胞测序,先用D-PBS冲洗,倒掉后加胰酶消化(此步时间不宜过长,细胞培养,作者- -般不超过五分钟),按1:5传代。
9. 细胞再次长到覆盖率80-90%左右, 将其消化后,常规冻存(冻存液要现配)。