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11.如何溶解引物?
答:干燥后的引物质地非常疏松,dna检测,开盖前好离心一下,或管垂直向上在桌面上敲敲,将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或10mM Tris pH7.5缓冲液,室温放置几分钟,振荡助溶,离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水,因为有些蒸馏水的pH值比较低(pH4-5),fish检测,引物在这种条件下不稳定。
12.如何保存引物?
答:引物合成后,经过一系列处理和纯化步骤,旋转干燥而成片状物质。引物在溶解前,室温状态下可以长期保存。溶解后的引物-20度可以长期保存。如果对实验的重复性要求较高,基因检测怎么做,合成的OD数较大,建议分装,避免反复冻融。修饰荧光引物需要避光保存。
凝胶阻滞迁移电泳检测服务(EMSA)
分子实验介绍——印迹(Western blot)检测
通过SDS-PAGE凝胶将细胞或生物样品内的蛋白按照蛋白分子量从大到小规律分离开。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如纤维素薄膜或PVDF膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,四川pcr,与对应的起反应,再与酶或同位素标记的第二起反应(目前主要用HRP标记的第二),经过底物显色或自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分(目前主要使用鲁米诺和二抗中的HRP反应发出荧光,通过仪器或者胶片显色)。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。
实验流程:细胞收集-细胞裂解,蛋白提取-蛋白变性-SDS-PAGE电泳-蛋白质转膜印记-蛋白封闭-目的孵育-二抗孵育-显色拍照
结果示例:
图 A不同大小的质粒转染细胞后,Western blot检测图片;B A蛋白不同培养时间后Western blot检测图片;C 使用Image pro plus软件对A蛋白灰度检测,A蛋白表达变化统计图