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细胞增殖检测
本公司应用MTT比色法, 检测细胞存活和生长。其检测原理为huo细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源性无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二jia基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的Formazan,用酶联mian疫检测仪在一定波长处测定其光吸收值,可间接反映huo细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿liu药wu筛选、细胞毒性试验、以及肿liu放she敏感性测定等。服务内容 1. 细胞接种:收到客户细胞后,我们会用细胞计数板计数细胞,得出细胞悬液浓度。计算出应稀释的倍数,按MTT试剂盒要求在96孔板内接种 相应浓度的细胞悬液;
2. 细胞培养:然后在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板,并实时观察细胞状态;
3. yao物处理并呈色:按不同浓度梯度加入yao物作用细胞;
4. 溶解,比色:加入MTT检测试剂,按操作要求孵育相应时间,在mei标仪内检测对照组和实验组的吸光值。并处理数据得出比色结果。
小鼠精原gan细胞分离富集和培养
成年小鼠gao丸中约有108个细胞,其中约有 2×104个是精原gan细胞,仅占gao丸生精上皮细胞总数的 0.02~0.03%,精原gan细胞数量太少不利于体外培养.分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件.寻找分离和富集小鼠精原gan细胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠为实验对象,细胞迁移实验,先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min,用胎牛xue清终止消化,原代细胞,用一次40-um孔径的滤器过虑制成单 细胞悬液,30%percoll不连续密度梯度法离心富集精原gan细胞,再根椐未分化精原gan细胞表面thy1.2(CD90.2)阳性CD117(c- kit)阴性特点用流式细胞仪将精原gan细胞分选出来,并在体外进行培养尝试. 结果:30%percoll密度梯度离心前CD117(c-kit)阳性细胞占13.80±3.34%,CD90.2阳性细胞占28.98±4.51%, 二者都阳性细胞占8.98±2.98%,CD117阴性CD90.2阳性细胞占18.36±2.67%;离心后 CD117(c-kit)阳性细胞占12.37±3.34%,CD90.2阳性细胞占56.98±4.51%,二者都阳性细胞占 8.20±3.98%,CD117阴性CD90.2阳性细胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)阳性细胞和二者都阳性细胞所占百分比前后 比较差异无显著性(Pgt;0.1),CD90.2阳性细胞和CD117阴性和CD90.2阳性细胞所占百分比前后比较差异有显著性 (Plt;0.05);采用CD117和CD90.2作为标志分子,percoll离心后细胞悬液经FACS分选后获得细胞纯度
细胞培养中常见的污染及解决方法
霉菌污染
正常情况下,培养基在 37℃ 培养箱中培养两三天,在倒置显微镜下仍保持透明,无杂质。一旦出现絮状杂质,显微镜下可见丝状和团块状漂浮物,菌丝明显。此时,虽然细胞仍在生长,河南细胞,但它们的生命状态会在长时间后逐渐恶化。
解决方法:用硫酸铜溶液擦拭 CO2 培养箱,细胞增殖,向托盘中加入饱和硫酸铜或消毒后加入饱和磷酸氢二钠高盐溶液,避免霉菌污染。
如果霉菌污染,暂时转移所有细胞,并立即使用 guo 氧擦拭培养箱,包括层板和内壁。将 guo 氧放在培养箱中一小时,使蒸汽扩散,待 guo 氧气味消散后,将细胞转移到培养箱中。值得注意的是,培养箱需要每两个月定期清洗一次,尤其是在梅雨季节。用 84 消毒液、清水和 75% 酒精连续擦拭培养箱,用紫外线照射也是一种有效的方法。
为防止霉菌污染,需添加 3μg/ml 、抑制素、fang
线菌素 D 或青链。一旦被污染,就不可能恢复,即使使用上述,也没有什么区别。对于支原体污染的细胞培养,选择是丢弃污染的培养物,并用使用新鲜的无支原体的储存液,消毒环境。如果所有的细胞都被污染了,那可能是整个培养系统污染了。因此,必须对培养基和实验设备进行检查。如果只是个别污染,可能是操作问题,有必要注意实验操作步骤的规范。