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条带中间出现白斑点
1. 原因：底物消耗过快，中间区底物消耗完不发光了；
2. 优化：降低蛋白量，降低一抗和二抗的浓度；
3. 解析：快速操作，在中间部位底物消耗之前就把胶光片定影出来，一般实验员很难把控制；首0选从降低蛋白量，降低一抗二抗浓度入手。
出现黑点
1. 原因：膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合；
2. 优化：封闭用的牛奶一定要纯并且完全溶解，封闭后至少洗膜一次；
3. 解析：确定封闭牛奶完全溶解，否则封闭时会导致不溶性颗粒附着在膜上，在发光时膜上会出现黑点；建议在牛奶溶解之后静止三分钟，轻取上层牛奶液进行封闭，封闭结束常规洗膜一次；孵育一抗或二抗时，需要加牛奶的也请参照此操作。
其他问题
1. 条带连成一片。多数原因是上样量过多，其次是样品弥散或中途停止了电泳；
2. 条带偏高或者偏低。常有可能是蛋白有修饰现象；还有可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应，例如说100KD以上的蛋白用的12%胶跑，或者说20KD的蛋白用的6%胶跑；再是蛋白有降解，会在比原来位置低的地方出现主带，Cryptococcus neoformans，跟着出现一些其他条带，明显现象是所有的条带比正常的都低，且条带模糊不清晰。
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