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磁性细胞标记方式
应用MACS技术进行磁性细胞分选重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记,并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。
1、直接磁性细胞标记(Direct magnetic cell labeling)
(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是快速、zui特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。
2、间接磁性细胞标记(Indirect magnetic cell labeling )
(磁珠结合不需要的细胞,原代细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞)间接磁性细胞标记需要联合使用单ke隆或者多ke隆抗ti和MACS间标微珠。未结合抗ti、生物素化抗ti或者荧光素标记抗ti均可作为一抗标记细胞,再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗,均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用:当没有直标磁珠时;需要用几种抗ti的混合物同时分选或去除多种类型的细胞;间接标记有放大作用,徐州细胞,因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用;使用自备或者配体的磁珠分选中。( -般而言,阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大,阳性分离法用行更多。)
MTT检测
MTT 是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活xi胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二jia基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免yi检测仪在 570nm 波长处测定其光吸收值,可间接反映活xi胞数量。
细胞培养中常见的污染及解决方法
黑点污染
黑色的游动点能穿透滤膜并在空气中扩散。它们在低倍镜下显示为黑色圆点,在高倍镜下显示为可移动的黑点。培养液也不浑浊,一般影响较小,因此细胞仍可使用。通常,细胞迁移实验,黑点污染后,细胞生长良好,运动物体无明显增加,培养基的颜色和透明度无明显变化。在同一批培养的细胞中也可以发现类似的现象。
解决方法:黑点对细胞生长状态没有明显影响,细胞增殖后会自然消失,因此除了置换外,细胞实验,无需特殊处理。如果细胞可能被小的运动点污染,建议增加培养皿细胞密度,以提高细胞存活率。