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利巴韦林( Ribavirin) 是一种广谱抗病毒核苷酸类化合物，能抑制多种核糖核酸(RNA) 、脱氧核糖核酸( DNA) 病毒引起的疾病。我国农业部公告第560号中明确规定抗病物为禁用兽药。然而，在我国禽类养殖过程中，违规使用利巴韦林等抗病毒性药物现象仍然十分普遍，禽畜滥用抗病物不仅会造成禽畜肉质风味的下降，还会导致禽蛋中大量的药物残留，进而通过食物链危害人类健康。
逗点生物采用Copure净化管中，建立了鸡蛋中利巴韦林残留量的UPLC-MS/MS检测方法。该方法低、中、高三个水平的加标回收率均在90-100 %之间，RSD小于3 %，操作简便快捷，能够作为客户鸡蛋中利巴韦林残留量的参考方法。
一、样品提取
称取混合均匀的鸡蛋液样品2 g（至0.01g）于50 mL 离心管中，加入 100 μg/L利巴韦林13C5标准溶液 50 μL 作为内标。加入1 mL 去离子水，涡旋混匀 1 min，再加入9 mL乙腈，涡旋混匀5 min，5000 r/min离心10 min，上清液待净化。
移取5 mL上清液至Copure®利巴韦林QuEChERS净化管中，涡旋混匀5 min，8000 r/min离心10 min，取上清液氮吹干，用1 mL初始流动相复溶，过0.22 μm滤膜，上机测试。
二、标曲配制
标准储备液：准确称取利巴韦林和利巴韦林13C5两种标准品 0. 010 g 于100 mL 容量瓶，先用少量甲醇超声溶解，再用甲醇定容至刻度，混匀，配制成终浓度为 100 μg/mL 的标准储备溶液。利巴韦林13C5标准品同法配成 100 μg/mL 内标储备液。
标准中间液：分别准确移取标准储备液各 1 mL 于 100 mL 容量瓶，用甲醇定容至刻度，混匀，配成终浓度利巴韦林为 1 μg/mL 的标准工作溶液，利巴韦林13C5内标工作液为 1 μg/mL。
标准工作液：逐级稀释，标准工作液上机浓度为：0.5、1、2、5、10、 20 μg /L，其中利巴韦林13C5内标浓度均为5 μg /L。
三、仪器条件
3.1 色谱条件
仪器：UPLC-MS/MS (Thermo Scientific TSQ Endura)
色谱柱：GL Science HILIC（100*2.1mm, 3μm）
流动相：A: 0.1%甲酸水溶液 B：乙腈
流速：0.3 mL/min
进样量：2 µL
柱温：30℃
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
表 1 梯度洗脱程序
3.2 质谱条件
离子源：HESI
电喷雾电压：3500V
鞘气压力：40 Arb
辅气压力：1 Arb
离子传输管：300 ℃
雾化温度：350 ℃
表2 组分名称保留时间及特征离子一览表(*为定量离子)
四、实验结果
表3 鸡蛋样品中低、中、高三水平加标回收实验结果
五、订购信息
