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竞争性PCR(competitive PCR， c-PCR技术
c-PCR技术是竞争cDNA模板与目的cDNA同时扩增.使用同样的引物，但一经扩增后。能从这些目的cDNA区别开来。通常使用突变性竞争cDNA模板.其序列与目的cDNA序列相同.不过模板中仅有一个新内切位点或缺少内切位点突变性的cDNA模板可用适当的内切酶水解，并用分光计测定其浓度。cDNA目的序列和竞争模板相对应的含量.可用澳化乙锭染色.电泳胶直接扫描进行测定或掺入放1射性同位素标记的方法测定。竞争模板开始时的浓度是已知的.则cDNA目的序列的zui初浓度就能测定。这种方法能准确测定mRNA中cDNA靶序列.可用于几个到10个细胞中mRNA的定量。
差示PCR (differential PCR， d -PCR)技术
d-PCR可以定量检测标本靶基因的拷贝数。它是将目的基因和一个单拷贝的参照基因置于一个试管中进行PCR扩增。电泳分离后呈两条区带，比较两条区带的丰度，或在引物5°-端标记上放1射性核素后.通过检测两条区带放1射性强度即可测出目的基因的拷贝数。
定量PCR(quantitative PCR， qPCR)技术
qPCR技术是用合成的RNA作为内标来检测PCR扩增目的mRNA的量，涉及目的mRNA和内标用相同的引物共同扩增.但扩增出不同大小片段的产物.可容易地电泳分离。一种内标可用于定量多种不同目的mRNA。qPCR可用 于研究基因表达。能提供特定DNA基因表达水平的变化.在癌1症、代谢紊乱及自身免1疫性疾病的诊断和分析中很有价值。
目前的病毒核酸检测试剂盒，多数采用荧光定量PCR方法，通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否含有病毒核酸。那么，核酸检测到底需要经过哪些步骤呢？概括起来，一步法荧光定量RT-PCR试剂盒，是 取样、留样、保存、核酸提取和上机检测五个步骤。
取样
采集人体的分泌物。用鼻咽拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧扁桃体处
留样
将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖
保存
将样本管放入密封袋中保存好，并及时送检
核酸提取
将样本送进实验室进行核酸提取
上机检测
将提取物进行荧光PCR扩增反应
