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发布时间：2021-09-10
抗l体的层析分离步骤基本
都可以采用标准化的三步曲：步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩；第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体，宿主蛋白等杂质；第三步是精纯去除剩余DNA，Endotoxin，Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中，步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上，也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因：首先是Protein A 价格昂贵，其价格是普通层析介质十几倍；第二，东曹TOYOPEARL层析填料，Protein A使用寿命短，一般离子交换填料使用寿命多达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次；第三，Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩，需要处理大体积的发酵液，而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析，使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此，要降低抗l体的生产成本，解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。
连续色谱层析简介
众所周知，传统色谱分离技术是采用固定的色谱塔进行，先进入一定量物料，然后采用洗脱剂不断洗脱，在同一出口在不同时间段就可接到不同的产品组分，此过程明显费时费力；而连续色谱分离技术则是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。在实际生产中，连续流层析可获得更高的产量，且成本更低，这是通过降低Protein A 填料用量和缓冲液消耗量实现的，东曹TOYOPEARL层析填料价格，由于操作稳定，其可更好地保证产品质量的一致性，并显著提高下游纯化的产量。传统色谱分离方式通常是单一色谱柱序列上样和洗脱，这就明显限制了介质的利用程度，而连续色谱层析技术平行采用多根色谱柱平行上样和洗脱，这种连续上样的方式无疑能够i大化介质的利用率。
连续色谱层析技术
尽管传统色谱分离技术被广为采用，但其仍存在一系列问题亟待解决：
? 溶剂消耗量大，综合生产成本居高不下；
? 填料使用量大，东曹TOYOPEARL层析填料多少钱，单位填料产出少，工业化生产成本进一步提高；
? 某些低分离度品种分离受限，无法工业化；
? 对于某些特殊样品（如手性药i物），没有太好的解决办法等等。
然而连续色谱分离技术能够实现物料连续使用，应用同等规模的填料和溶剂却可大幅度提高样品处理量，对于某些化学结构相类似的成分，仍然能够获得较理想的分离度和样品回收率。该技术主要能够很好地解决大、小分子原i料药、功能糖等的连续化分离问题，在降低缓冲液用量的同时，提高填料利用率，降低生产成本，目前已经广泛应用于石油化工、食品工程和生物化工等领域，如：
ü 糖醇类分离：果葡糖浆、菊粉、低聚果糖、海藻糖、阿拉伯糖、木糖醇、核糖等；
ü 手性药i物和天然产物分离：紫杉醇、鱼i油、芍药苷、大豆卵磷脂、氟i西汀、酮洛i芬等；
ü 精细化工：香精香料、色素、不饱和脂肪酸等；
ü 石化：PX及其类似物、碳五碳六中正异构烷烃等；
ü 生物大分子：蛋白多肽（亲和层析）、核酸等。
