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发布时间：2021-07-22
反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的TFA和乙腈或其他杂质？
TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除，国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤，其中，离子交换层析效果比较好，还可以起到浓缩样品的作用。
首先，山东工业制备色谱，冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和乙腈，药品实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量，只要不超过允许范围，这种办法是很简单、有效的。
其次，工业制备色谱哪家好，如果你的药品的分装量不大的话(lt;100ug)，建议你用离子交换层析，尽量装一个小一点儿的柱子，让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/mL以上，稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛，工业制备色谱哪家效果好，考虑稀释，尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话，可能会形成TFA盐，工业制备色谱方法，这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗，然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸，再干燥后形成盐酸盐。
制备色谱柱如何测柱效？
可以选择几种物质，苯，萘、蒽等的衍生物上柱，流动相一般用65-80%的甲醇/水，测定后根据保留时间计算塔板数。由于制备色谱的管路死体积一般比较大，很难得到和供应商相同的柱效。建议在制备柱开始使用时在自己的色谱上测一下柱效，然后定期检测柱效进行以进行比较。
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多肽的分离制备，如何上量？如何增大分离度?
反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。
关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6mm内径）上做一下实验，找到很大的分离度，这一过程的难度是很大的，要不断地改变流动相和固定相，然后再线性或非线性放大到制备，放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。
还可以考虑离子交换来分l离。
