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iPS细胞这一名词,全称为诱导性多能ips(induced pluripotent stem cell),缩写名来源于各个英文单词的首字母。
胚胎iPS的获取,不可避免的要严重的伤害乃至杀1死胚胎,这在很多国家已经是法律上的杀1人罪行了。所以,胚胎iPS的相关研究在各国都受到严格监管,实质上陷于停顿,而iPS细胞就不存在这样的伦1理问题,无需受精卵或胚胎,仅仅是提取一些体细胞,就可以将其转化为与胚胎iPS相同的多能细胞,细胞增殖检测试剂盒,可谓是巨大的进步了。
细胞冻存
细胞密度达到80%~90%时,去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。
加入lml冻存液(90%血1清,10%DMSO),放入冻存盒内(盒内有异丙1醇,以保证温度降低的速度),立即放入一80℃冰箱内,过夜,第二天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放人液氮,可以保存三个月。
冻存液的配制:70%的完全培养基 20%FBS 10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。
细胞复苏
将冻存细胞从液氮中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中,加入10ml预热的DMEM完全培养基,轻轻吹匀,离心,2000rpmX2min,弃上清液。
加入10ml DMEM培养基清洗,弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基,轻轻吹打,接种于10cm盘中,在含5%CO2的细胞培养箱中培养。