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等温核酸试剂盒
RNA试剂盒使用方法
使用时一定要根据自己的实验需要购买专用提取试剂盒, 如果不是专用试剂盒,或许能提出RNA,但不能确保其质量以及完整性,会影响RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析等后续实验的结果。
当前提取效果好的是QIANGEN公司生产的RNA提取试剂盒,但其售价较高,单次实验费用花费太大,对精度要求不高的实验没有必要购买,当然还有其它的进口试剂盒,但是均存在价格高、订货周期长的问题(如果碰上国内无货的时候,要从国外发货,会等很长一段时间)。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以,价格不高,基本上各地均有现货,如天根(目前国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种)等,天津TwisAmp nfo,其价格比进口试剂盒要便宜许多,且效果还不错,性价比还可以。
当然,就RNA的提取而言,不一定试剂盒的提取效果就非常好,其实采用一些经典的RNA提取方法,效果也很不错,如:TRIZOL、EDTA等,只是试剂盒使用方便,经典的方法操作复杂一些。
等温核酸试剂盒
什么是RPA?
概念:
重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,适宜反应温度在37°C左右。
等温核酸试剂盒
FAQ
1 RPA能实现多重化吗?
可以。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。不过,多重化的引物组合需要精心设计,以便每个引物都能同样有效的工作。需要注意的是,RPA反应的引物总量(nmol)不要超标太多。如果在一个反应中使用两个以上的扩增引物,就应该控制不同引物的量。另外,我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、设备以及荧光团的兼容性。