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关 键 词:泰州台式低速离心机
行 业:机械 仪器仪表 试验机设备
发布时间:2020-04-24
2、沉降系数
1924年,Svedberg定义沉降系数为颗粒在单位离心力场作用下的沉降速度。即:
S=(dR/dt)/ω2R (4–11)
沉降系数的物理意义是颗粒在离心力作用下从静止状态到达极限速度所经过的时间。沉降系数的单位用svedberg表示,量纲为秒,1 svednerg=10-13秒,简称S。
将式4–10二边同除以ω2R,得到沉降系数的表示式:
S=(dR/dt)/ω2R=d2(Pp-Pm)/(18ηf/f0) (4–12)
从上式可知:在给定的介质中沉降系数的大小主要是由颗粒直径的平方和摩擦系数f/f0所决定。
一、高速冷冻离心机
1. 未经过培训和考核者不能使用。
2. 选择合适的转头和转速,绝不可超速使用。
3. 选择合适的温度,通常4℃,除有机溶剂外不要低于零下,以免冰冻,损坏离心管和转头。
4. 转头使用前必须用擦孔棒将管空擦净,并仔细检查有无裂痕和孔底白斑。若有,转头报废。
5. 离心管内装载的溶液量必须合适。不锈钢管无盖,只能装2/3,塑料管可装至肩部。管盖必须盖严绝不允许漏液。空管离心会变形。塑料管使用有机溶剂必须符合规定。
6. 离心管必须成对放置,必须严格平衡,偏差<0.1g 。
7. 不允许无转头空转,放取转头必须用手柄以防转头滑落。转头要轻放、卡稳,旋下手柄时要用手扶住手柄只转转头。转头盖要盖严,无盖不准离心。
8. 离心时不准打开机盖,不准扒扶在离心机上,如有异常声音和振动时立即停机。
9. 转头使用后必须及时由转头舱中取出、擦干,用擦孔棒将管孔仔细擦净。如有溶液溢出必须清洗干净,擦净转头舱内凝水,开门晾干转头舱。
10. 使用离心机必须预约,用后必须登记。
2)等密度离心法
某些密度梯度介质经过离心后会自身形成梯度,如Percoll则可迅速形成梯度,CsCl、Cs2SO4和三碘苯甲酰葡萄糖胺经长时间离心后也可产生稳定的梯度。需要离心分离的样品可和梯度介质先均匀混合,梯度介质由于离心力的作用逐渐形成管底部浓而管顶稀的密度梯度,与此同时原来分布均匀的颗粒也发生重新分布。当管底介质的密度大于颗粒的密度即ρm>ρp时,颗粒上浮;当管顶介质的密度小于颗粒的密度即ρp>ρm时,则颗粒沉降;后颗粒进入到一个它本身的密度位置即ρp=ρm,颗粒不再移动,形成稳定的区带。等密度离心法需时间较长,一般为十几小时至几十小时。
梯度材料的选择原则 ①对被分离的生物样品无作用,不会使生物样品失活;②在溶液中稳定,在离心作用下不会解离或聚合;③在使用的密度范围中,粘度低,渗透压小,离子强度及pH值变化小;④易与被分离的颗粒分开;⑤不会对离心机设备发生腐蚀作用;⑥便于浓度测定等等。这些原则当然比较理想,完全符合每种性能的梯度材料几乎是没有的。下面介绍几种基本上符合上述原则的梯度材料:
(1)糖类:蔗糖、甘油、聚蔗糖(ficoll)、右旋糖酐、糖原等。
(2)无机盐类:CsCl(氯化铯)、RbCl(氯化铷)、NaCl、KBr等。
(3)有机碘化物:三磺苯甲酰葡萄糖胺(martizamide)等。
(4)硅溶胶:Ludox的各种类型,如Percoll。
梯度液的收集 离心后颗粒在梯度液中分层,小心取出离心管,防止振摇以避免分层的
颗粒混和。收集梯度液中颗粒的方法很多,有管底穿孔计滴法、插管虹吸计滴法,浓液顶替法和注射器穿孔抽取法等。
1、差速离心法
差速离心法是指通过不断增加相对离心力,使沉降速度不同的颗粒,在不同离心速度及不同离心时间下分批离心方法。差速离心法一般用于分离沉降系数相差较大的颗粒。
进行差速离心时,首先要选择好颗粒沉降所需要的离心力和离心时间。离心力过大或离心时间过长,容易导致大部分或全部颗粒沉降及颗粒被挤压损伤。当一定离心力在一定的离心时间内进行离心时,在离心管底部就会得到和重颗粒的沉淀,分出的上清液进一步加大转速再次进行离心,又得到第二部分较大、较重颗粒的“沉淀”及含更小更轻颗粒的“上清液”。如此多次离心处理,即能把流体中的不同颗粒较好地分离开,此法所得沉淀是不均一的,仍杂有其它成份,需经再悬浮和再离心(2~3次),才能得到较纯的颗粒。
差速离心法主要用于分离细胞器和病毒。其优点是:操作简单,离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开,并可使用容量较大的角式转子;缺点是:(1)分离效果差,不能一次得到纯颗粒。(2)管壁效应严重。特别当颗粒很大或浓度很高时,在离心管一侧会出现沉淀。(3)颗粒被挤压,离心力过大,离心时间过长会使颗粒变形、聚集而失活。差速离心的分辨率不高,沉降系数在同一个数量级内的各种颗粒不容易分开,它常用于其他分离手段之前的粗制品提取。各种颗粒的沉降速度遵循式4—10。颗粒愈大,沉降速度也愈大,离心后沉淀到离心和底部所需的时间愈短。
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