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⑵脱水:是将组织细胞所含水分除去。通常用乙醇(Alcohol,酒精),浓度递升到 100%。此过程还使组织块进一步硬化。
⑶透明:是用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的有机溶剂 组织切片,将组织中的酒精取代 组织切片机,以便石蜡浸入。通常用二甲苯(xylene)为透明剂。
⑷浸蜡:在温箱内进行。已透明的组织块放入加热融解的石蜡中,让石蜡浸透组织,作为支持介质。
⑸包埋:将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中,迅速冷凝 动物组织切片,组织决便被蜡包埋。
⑹切片:用切片机。常用的切片机有轮转式、平推式的。用轮转式的易于切出连续切片。切片厚度随制片目的而调整。教学标本厚度多是5~6μm。
⑺贴片烤干:石蜡切片在温水上展平后 濮阳组织切片,移在玻片上,烤干,即可供染色处理。染色后用树胶、盖坡片封固,可永久保存。
下面从原理方面简要介绍几种常用的组织化学染色技术:
1、显示琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的硝基-BT法:
(Succinate dehydrogenase)
⑴酶的定位及生物学意义:
琥珀酸脱氢酶是线粒体标志酶,其存在于所有有氧呼吸的细胞,和线粒体内膜紧密结合。该酶不需辅酶而自身有黄素蛋白(FP,Flavoprotein)为辅基。在组化反应中常用来反映三羧酸循环的情况。
⑵原理:上述的反应最后一步的原理是,硝基-BT(Nitro-blue tetrozolyum,四唑氮蓝)系异环族化合物四唑盐,当它接受氢时,本身被还原为有色沉淀产物(甲)(Formazan)。