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产品规格：100T/200T/500T
产品数量：1000 个
包装说明：原装
关 键 词：生物化学
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发布时间：2017-04-22
品牌： Biomics Biotech 保存条件： 避光保存于-20℃ 供应商： Biomics Biotech 数量： 大量 保质期： 6个月以上 规格： 100T/200T/500T 规格： 100T 产品价格： 咨询 规格： 200T 产品价格： 咨询 规格： 500T 产品价格： 咨询 试用产品：一步法实时荧光定量PCR检测试剂盒（5次量） 申领时间：2014.06.03-2014.06.22 试用细则： 1、活动针对学校、医院、科研院终端客户所在实验室，每个实验室只能申请一份试用装 2、参加过往期试用活动的客户无法参加本次活动 3、江浙沪地区优先 4、本次活动邮费均有我公司承担 5、申请结束后，我们会统一审核申请信息，并与审核通过者电话联系确认 6、收到试用装后1个月内提交优秀试用报告者，可申请8折购买本产品 7、最终解释权归Biomics所有 扫一扫，更多惊喜等着你 备注： 1、试用报告模板可通过【该页面最下方】或【管理中心-试用中心】下载（填写之后发至） 2、若您是要检测microRNA，需要准备microRNA特异引物，可配套我们的【miRNA特异引物试剂盒】使用 3、扫描公司二维码或搜索【Biomics-RNAi】，关注百奥迈科微信平台，也可有机会获得一步法实时荧光定量PCR检测试剂盒试用装（5次量） EzOmics TM 一步法实时荧光定量PCR 检测试剂盒 货号：BK2100 产品包装： 保存于-20℃ EzOmicsTM 一步法qPCR检测试剂盒有100，200，500和2000次(50μl/反应) 四种不同规格的包装。 包装规格 描述 100次反应 200次反应 500次反应 2000次反应 2×Master Mix 1.25ml×2 1.25ml×4 1.25ml×10 1.25ml×40 2×mix包含反应缓冲液，反转录酶，热启动DNA聚合酶，RNase抑制剂，dNTPs，6mM MgCI2，稳定剂等等。 50×SYBR Green I 150μl×1 300μl×1 试剂 300μl×10 SYBR Green I 保存浓度为反应浓度的50倍 50mM MgCl2 1.0ml×1 1.0ml×2 1.0ml×5 1.0ml×20 改变Mg2 ＋浓度，优化定量PCR条件 DEPC-H2O 1.5ml×1 1.5ml×2 1.5ml×5 1.5ml×20 DEPC处理无菌水，不含DNase和RNase。 产品说明： EzOmicsTM 一步法实时定量PCR检测试剂盒，采用一步反应法完成整个RT-qPCR过程，将RNA反转录成cDNA，cDNA模板qPCR定量放在同一反应体系中进行，反应过程无需增加额外的步骤。本试剂盒具有方便、简捷、灵敏度高、重复性好的特点，即适用于SYBR Green I荧光染料法，同时也适用于荧光探针的检测方法。此试剂盒适合市面上大多数现有的Real-time PCR仪器. 反应条件及使用建议 反应混合体系配制建议： ?一般建议至少配制比样本多一个反应体系的混合体系(例如：如需要8个样本，配制9个混合体系)。 建议添加无模板对照(Non-Template control，NTC) ，即添加DEPC-H2O 取代模板。 反转录 cDNA合成所需温度，可以在37℃～45℃进行设置，根据模板和反转录引物，选择特异性好，效率高的温度。 热启动DNA聚合酶 EzOmics TM 一步法qPCR检测试剂盒中使用的是热启动Taq DNA聚合酶，在常温条件下，酶的活性受到抑制。只有通过95°C反应10 min，激活热启动酶的活性，参与下一步qPCR反应。 MgCl2 浓度优化 MgCl2 是DNA聚合酶的一个复合因素。终浓度为3mM的MgCl2 浓度适用于大部分反应。然而，MgCl2的需求往往不尽相同，这取决于特殊的模板和引物。尤其是使用SYBR Green I荧光探针时，往往需要更高浓度的MgCl2。 建议针对合适的模板，设计3个重复反应，按下表格给的MgCl2浓度梯度。下表为50μl体系中MgCl2达到各终浓度时的需要加入的量。 根据实验结果，分析扩增效率、熔解曲线等，选择最佳的MgCl2 浓度用于之后的相关qPCR的实验。 引物设计和浓度 大多数情况下，引物终浓度为200nM是能够满足PCR反应。不过，根据特殊的模板和引物，引物终浓度可以在25 ~ 900 nM范围内进行优化。引物设计可借助于实时荧光定量PCR引物（探针）设计软件（如：Beacon Designer）。为获得最佳定量结果，产物大小最好控制在80 ~ 200bp的范围内。 模板浓度 过量的模板会抑制反应的进行。通常情况下，每50μl反应体系中，总RNA含量在10ng～200ng是足够的。当然特殊的基因会有所不同。 探针浓度 多数情况下，引物和探针的摩尔比控制在3:1比较合适。根据实际情况，探针的浓度可在10 ~ 250 nM范围内进行优化。 熔解曲线分析 如果使用SYBR Green I染料法，建议在qPCR反应结束后进行熔解曲线分析，若仪器含有此功能。请参照仪器制造商推荐的使用方法说明。不含模板的阴性对照（NTC）用来确定反应过程中是否存在引物二聚体，含有模板的反应体系确定产物是否单一。 注：可以跑琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的特异性。 实验方法 SYBR Green I 染料法 荧光探针法 保存和稳定性 试剂盒避光保存于-20°C。避免反复冻融。此储存条件下，试剂可保存6个月以上。
