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关 键 词：M-MLV
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发布时间：2009-06-11
M-MLV逆转录酶 产品简介： 本 M-MLV逆转录酶由含有从Moloney Mμrine中克隆的Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase基因的重组大肠杆菌表达。本M-MLV逆转录酶是一种经过改造和优化的M-MuLV逆转录酶，也是一种依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶，可以以RNA或DNA为模板在引物存在的情况下完成互补DNA链的合成，M-MLV逆转录酶具有减弱的Ribonuclease H(RNase H)酶活性。 产品组成： 产品组成 110001 110002 规格 10000U 50000U M-MLV逆转录酶 50μl 250μl 5×M-MLV酶Buffer 200μl 1000μl 活性定义： 1单位(U) M-MLV逆转录酶活力单位定义为在37℃条件下，10分钟内能够催化1nM dTTP，模板为poly（A） oligo（dT）25，形成酸性不溶性物质所需的酶量作为一个活性单位。 质量控制： 经检测不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含 M-MLV反转录酶本身含有的RNase H酶活力以外的RNA酶。 使用方法： 以cDNA第一条链的合成为例， 1.RNA的变性：（以20μl为例，可根据比例放大或缩小） 组分 备注 体积 ddH2O DEPE-treated Water 11-x μl Templat RNA Total RNA 0.1-5μg / Poly(A) RNA/mRNA 10-500ng / Specific RNA 0.01pg-500ng X μl Primer Oligo(dT)12-18 10pmol / random hexamer 25pmol / Gene specific primer 10pmol 1 μl dNTP Mix 10mM 2 μl 轻轻混匀，随后离心沉淀液体，将离心管于PCR仪上65°C反应5分钟，降温至4°C后取出置于冰上。 2. 反应体系配制： 组分 备注 体积 上述变性后退火反应液 14 μl 5×M-MLV酶Buffer 4 μl RNase Inhibitor 20 U/μl 1 μl M-MLV逆转录酶 200 U/μl 1 μl Total volμm 20 μl 3. PCR仪上进行下例反应： （使用随即引物时请进行30°C孵育10分钟，可使模板充分退火、延伸） 42°C反应30-60分钟； 95°C，5分钟（长片段DNA扩增时为了避免cDNA降解，请进行70°C，15分钟）； 4°C，5分钟。 逆转录产物可以直接用于后续的PCR等反应，也可以-20°C冻存以备以后使用。 储存条件： -20℃保存。 有效期： 一年。 注意事项： EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对M-MLV反转录酶有抑制作用。 PCR扩增没有获得特异性条带时建议先使用GAPDH、actin等作为内参进行PCR扩增，看是否可以成功扩增。如果可以成功，则说明PCR扩增体系没有问题。 相关产品： 产品 产品号 规格 2X PCR Master Mixture（不含染料，无色） 102001 0.5ml Pfu DNA Polymerase 104003 500U M-MLV 逆转录酶，Rnase H-，点突变 110003 10000U AMV 逆转录酶 110005 200U cDNA第一链合成试剂盒 111004 100 reactions 两步法RT-PCR试剂盒 111005 20 reactions 一步法RT-PCR试剂盒 111012 100 reactions dNTP Mixture (10mM each) 109001 500μL Water, Dnase/RNase-Free, DEPC Treated 109004 100ml Oligo (dT)18 引物 109005 100μl 随机引物 109006 100μl 50bp DNA Ladder Marker 130001 50T 100bp DNA Ladder Marker 130004 100T DL2000 DNA Ladder Marker 130005 50T DNA Marker V 130016 100T pGM-T 连接试剂盒 120001 20 reactions T4 DNA 连接酶 120005 200U
