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精子手工计数原理及操作方法1.原理：将精液用适当的稀释液作一定量稀释后，混匀注入计数池内计数，再算出每毫升精液中精子数。2.方法（按照***版第四版《全国临床检验操作规程》）1).于小试管内加精子稀释液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀释液内混匀。2).充分摇匀后,滴入改良Neubauer计数板的计数池内,静置1~2分钟,待精子下沉后,以精子头部作为基准进行计数。3.计算1).如每个**中方格内精子少于10个,应计数所有25个中方格内的精子数。2).如每个**中方格内精子在10~40个,应计10个中方格内的精子数。3).如每个**中方格内精子多于40个,应计数5个中方格内的精子数。公式：精子数=计数结果/计数中方格×25×1/计数池高度×20×103/ml=计数结果/计数中方格×1/计数池高度×5×103/mlHAMILTON THORNE精子分析仪可分析参数，摆动性（WOB）：实际的曲线路径关于平均路径的摆动值。北京精子分析W.H.O 6
医生为了鉴定男性生育能力，常嘱男方作精液检查，正常精液颜色为灰白色或乳白色。如节欲时间长者，可呈淡黄色，若出现鲜红色.暗红色，则提示患者有炎症或生殖道损伤。每次排精量为2~6毫升，常受排精次数与频率的影响。新鲜精液呈稠厚胶冻状，1小时之内应液化为稀薄的液体，用一根小玻璃棒插入精液中再提起，所形成的精液丝长度一般不超过2厘米，否则视为异常。精液呈弱碱性，PH值为7.2~7.8。正常精子数应超过2000万/毫升。排精后1小时内活动精＞=50%。世界卫生组织推荐精子活动力分为四级：0级：不活动；1级：精子原地摆动；2级：有中等的前向运动；3级：前向运动活跃，快速直线运动。正常的精子活动力为2~3级的精子＞=40%~50%.精子形态：畸形精子小于50%。分析男性生育能力不能单从精液的一项指标定论，应对精子数量活力活动率液化时间畸形率等多方面进行综合能力分析。采集精液前5～7天内必须停止性生活，并且不得有**、梦遗等情况，还应禁烟戒酒，忌服对生精功能有影响的药物等。上海全自动化精子分析Hamilton Thorne精子分析仪是一款功能强大、准确可靠的精子质量评估设备。
美国HamiltonThorne的TOXIVOS精子分析仪已经被FDA和国内外毒理学实验室所使用。本试验研究目的对精子分析仪和血细胞计数板在大鼠附睾精子计数结果的比较验证。方法选取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,对三批次雄鼠的精子计数进行比较。健康雄鼠通过戊巴比妥钠麻醉实施安乐死后,取左侧附睾尾称重,将附睾尾部放入37℃预热的含有M199培养液平皿中,剪碎附睾尾,放入培养箱中37℃孵育5min,然后吸取1份精子悬液,用M199培养液进行一定倍数的稀释,混匀后,取1滴稀释液,滴入精子分析仪**载玻片上,将载玻片放入TOXIVOS精子分析仪载物台,进行精子计数,同时吸取稀释后的精子悬液滴入血细胞计数板内,通过光学显微镜进行计数,比较两种计数方法的差异性。结果***批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为165.9±91.7,140.0±59.6。三个批次的精子分析仪和血细胞计数板的精子计数结果无统计学差异(P>0.05)。结论精子分析仪是一种方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理学研究中具有重要的应用价值。
精子分析仪使用注意事项1.样品制备是CASA取得高质量检查结果的关键。CASA采用深度为10um样品池，能保证精子在单层界面内自由运动。取样分析前标本必须充分混匀，用微量取液器取5~7ul**加入样品池中，用0.5mm厚皿盖片盖紧。2.不洁净的计数池可影响精子的活力，尤其影响灰度CASA精子计数的准确性。3.精子样品密度过大时，造成图像处理上的粘连，无法分析每个精子的运动特性。**中所含精子太少时，需增加检查视野数量或者使用低倍物镜观察，以提高样品检出率。CASA系统可以给出多种精子运动状态的参数，这些参数能够帮助更有效地了解精子的运动特性。
HamiltonThorneIVOS是一套整合了光学观察系统的精子动力分析仪。如今，IVOS已成为快速、准确、稳定可靠的进行精子分析的代名词。仪器特点：新款内建CDWriter!内部整合光学系统自动化，内置样品台可用于多种样品分析仪器操作简单提供满足需求的分析结果实时质量控制分析结果列表内部整合的光学系统IVOS是***一套内置光学系统的精子动力分析仪。与其它同类产品相比，IVOS并不采用显微镜持续照明方式，而是采用闪光拍摄方法。这种拍摄方法能够消除由于精子运动而造成的位置模糊。通过60祯/秒的拍摄速度，能够得到准确可靠的精子速度和运动参数分析结果。IVOS可在以下三种模式下分析精子样品：相差，明场和多波长荧光模式。自动化内置加热平台作为整合光学系统的一部分，由计算机控制的IVOS样品平台可在分析时提供准确的温度控制和位置定位。样品台的温度可在室温到40°C范围内调节，稳定度为0.5°C。分析区域的选择可选用自动或手动方式。样品台的温度和位置可实时显示在视频窗口中。IVOS还允许用户自己进行分析室设定，控制分析样品量。CASA系统操作简便，检测速度快，且重复性优于人工检测。上海CASA精子分析VAP
精子分析仪能分析与精子运动功能相关的各种参数。北京精子分析W.H.O 6
CASA系统也可用于精子形态学评估。CASA系统可用来定量分析精子头部形态学、中段甚至主段的形态，可以把精子头部和中段分类为正常或者不正常，还可以给出头部和中段尺度、头部椭圆率和匀称性的均数、标准差和中位数，以及对染色的精子顶体区进行测量[3]。与人工操作相比，自动化系统更具客观性，精确度和重复性的潜力[4]。精确度和重复性不低于7%[5]，这优于有经验的技术人员的手工评估。两个研究已经提示在CASA结果与生育力之间存在***联系。Coetzee等发现自动分析的正常精子形态的结果是预示体外受精率和妊娠率的有意义指标[6]。Garrett等发现**中能与透明带结合的、具有某些头部形态特征的精子所占的百分比（Z%），和直线速度（VSL）的精子的百分比，与大样本的低生育力夫妇的自然妊娠率是有***且**的关系。Z%和VSL与生育力间的关系显示是连续的，而且没有显示临界值；高于临界值，妊娠率也不会进一步增加[7]。北京精子分析W.H.O 6
