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关 键 词：武汉磁珠法
行 业：化工 化学试剂
发布时间：2023-04-01
福尔马林固定石蜡包埋技术（Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE）是一种组织保存技术。这种技术为了维持细胞核的蛋白结构，先用福尔马林固定然后将组织用固体石蜡包埋，以供切片后作组织学诊断或研究使用。
FFPE样本DNA提取试剂盒使用中为什么要脱蜡？
如果要对FFPE组织进行分子生物学研究，开始的就是要进行DNA的提取。 但是固定剂的交联作用对核酸是有害的，福尔马林石蜡和交联作用会妨碍核酸的提取，抑制DNA聚合酶的活性从而影响PCR扩增。除此之外，石蜡阻碍消化液对组织的渗透，从而抑制蛋白酶K和组织内蛋白的接触，影响组织消化和DNA释放。所以为了消除石蜡对DNA提取和PCR扩增的不良影响，必须在保证不增加外源性PCR抑制因子，并尽量减少DNA额外损伤的前提下对组织进行彻底脱蜡。
FFPE样本DNA提取试剂盒的应用步骤：
1、从源头抓起，完善样本的前处理
离体时间：取材后应在30min内及时固定，防止组织变质。
样本要求：选择合适大小的组织块制作石蜡包埋组织样本，一般不超过15x10x5mm。
固定液选择：建议使用10%中性福尔马林固定液，对组织进行固定，固定液应为被固定标本体积的5-10倍，并定期更换。
固定时间：根据样本情况调节固定时间，一般在24-48h为宜，固定时间过长会加重FFPEDNA的片段化。
包埋要求：选用纯净且熔点适宜的蜡，包埋要迅速，禁用明火。
切片厚度：包埋好的组织样本根据需要确定切片厚度，标准切片厚度为4um，用于核酸提取的切片可以在10-20um，保证切片厚度的持续稳定。
2、选择合适的提取试剂盒
目前市场上有多种提取试剂盒，应选择合适的试剂盒才能保证实验的成功率。
FFPE样本DNA提取试剂盒中常用的法脱蜡法的过程和问题：
目前应用在成熟试剂盒中的脱蜡方法主要是溶剂脱蜡法，其中脱蜡法由于其脱蜡彻底的特性，较广泛的应用在疾病研究中。
在脱蜡法中，需要将石蜡包埋组织浸泡在溶液中进行脱蜡，后面经过两次高温处理，每次各一个小时，分别在56℃和90℃。在此期间结合消化缓冲液和蛋白酶K来消化组织，同时利用梯度乙醇来疏松组织结构、促进消化液渗入并去除组织中痕量。
FFPE样本DNA提取试剂盒的应用：
福尔马林由于可以与蛋白氨基发生不可逆交联，所以对保持组织细胞结构的完整性、抗原可测定性、组织渗透性方面均优于其他固定液。因此，FFPE技术长期以来在检验、科学研究中得到广泛应用，尤其是细胞形态学研究和病理学研究。随着这几年分子诊断领域的不断发展，FFPE技术也越来越多的被应用在对疾病进行分子诊断。
FFPE样本DNA提取试剂盒的产品特点：
1、基于纳米磁珠的提取纯化技术；
2、高载量，高提取效率；
3、适合手工提取及自动化工作站使用； 操作便捷；
4、提取产物可用于PCR、实时荧光定量PCR、二代测序等。
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