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关 键 词：深圳磁珠法核酸提取
行 业：化工 化学试剂
发布时间：2023-02-27
血浆病原DNA提取试剂盒的操作简便性也是血浆DNA提取试剂选择的一个重要因素。操作过于复杂，不仅费时费力，还容易导致样本间的交叉污染，也容易损失样本。
血浆病原DNA提取试剂盒中时间成本、生产率的考虑：
当一次处理超过50个样本时，不再考虑使用小量柱纯化，高通量DNA提取试剂盒是更好的选择，它可以以96孔的形式运行，以便在需要同时处理多个样本的DNA的实验。
DNA提取试剂盒有各种规格和大小，然而，共同的主线是，所选择的试剂盒能产生干净和浓缩的DNA。可以定期评估DNA提取物的数量和质量，以确保试剂盒适合此应用类型。
不同的DNA来源有不同的试剂盒，从实验室培养的细胞，到土壤样本，甚至指纹，也有许多用于某些应用的试剂盒。例如，土壤中的腐殖酸或血液中的血红蛋白会污染纯化的DNA，从而干扰下游的DNA实验（如PCR）。当然，也有一些试剂盒会在进行纯化步骤之前去除这些组分。如果想从PCR或琼脂糖凝胶中纯化DNA，有许多方法可以提高琼脂糖凝胶纯化的回收率。
血浆病原DNA提取试剂盒的操作步骤：
1、取出洗涤液，按以下操作：
洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇，混匀。
洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。
配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
2、取1.5mL离心管，加入200μL血液样本，再加入200μL 裂解液及40μL 消化液，振荡混匀，65℃水浴10 分钟。
3、加入150μL异丙醇（总体积的25%），混合均匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。
4、将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液；
5、将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。
6、将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。
7、按每份样本40μL 取洗脱液，放置于灭菌1.5mL离心管，65℃预热。
8、将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
9、取出吸附柱，放入新的1.5 mL 灭菌离心管内，在吸附柱中心加入40 μL 预热洗脱液，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
一般来说，血清血浆的量与提取的核酸量成正比。因而，如果要提高核酸得率，可通过增加血清或血浆的量来实现。一般地，做血浆或血清核酸提取，样本量在1ml以上。如果1ml或更大量样本得不到满意的检测结果，则应及时考虑更换提取试剂盒。血浆病原DNA提取试剂盒的核酸提取得率较高，1ml病人血浆样本DNA得率在85ng左右，Q的得率在72ng左右，T的得率在63ng左右，基本上都能满足下游PCR实验的需求。其检测下限为2ng/ul。如洗脱液为30ul，则需要1ml左右的血浆才能检测出来。显然，如果是健康人的血浆，1ml血浆的DNA浓度更低。因而，血浆DNA提取完成以后，应该直接做PCR。
血浆病原DNA提取试剂盒使用注意事项：
1、裂解液、洗涤液含有一定性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入鼻和口中。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。
2、如血液量不足200μL，请用0.85% 生理盐水补至200μL；如血液量超出200μL，请使用中量血液DNA提取试剂盒或血液富集DNA提取试剂盒。
3、如果提取的血液为鸟类、禽类的血液，因有核红细胞较多，提取血液量应适当减少，研究者应该进行优化实验，选择合适用量。
4、提取的DNA如暂不使用，应-20℃保存。
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