较大程度避免样本中的损失 应用范围广泛 济南游离DNA
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关 键 词：济南游离DNA
行 业：化工 化学试剂
发布时间：2023-02-16
体液病原DNA提取试剂盒操作简单、快速，所得病原DNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于PCR、RT-PCR、 Real-Time PCR 、印迹等分子生物学实验。
一般来说，核酸分离方法包括酚仿抽提法、冻融法、煮沸法和硅胶膜吸附、磁珠分离等，提取步骤中一般含有细胞裂解、沉淀，离心、漂洗、洗脱、溶解核酸等过程。目前在体液病毒DNA的提取过程中，一般采用硅胶膜吸附或磁珠分离法，经常会用到蛋白酶k加热消化、处理、含醇洗液漂洗、加热洗脱等步骤，操作较为繁琐，现有的一些试剂盒含有具有一些有毒物质，会损害人体健康。另外，受到洗脱液体积的影响，往往难以将回收到的dna全部用于检测，进而影响了检测灵敏度。
体液病原DNA提取试剂盒的操作步骤：
1、200μl血清等体液（需回复到室温，不足可用0.9%NaCl或者PBS补足）转入上述1.5ml离心管，加入400μl裂解液DLB，立刻涡旋振荡充分混匀。
2、室温(15-25℃)放置10分钟，每隔5分钟，振荡混匀一次。
3、加入450μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境高于25℃，乙醇需要冰上预冷后再加入。
4、将上述混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。如果总体积超过750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱AC中。
5、加500μl去蛋白液RE，12000rpm离心30秒，弃废液。
6、加入500μl漂洗液WB，12000rpm离心30秒，弃废液，加入500μl漂洗液WB，重复一遍。
7、将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8、取出吸附柱AC，放入一个新的离心管中，在吸附膜的中间部位加30-50μl洗脱缓冲液EB（事先在65－70℃水浴中加热效果更好），室温放置1分钟，12,000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，12,000rpm离心1分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要的DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是至小体积不应少于20μl，体积过小降低洗脱效率，减少DNA产量。
9、DNA可以存放在2-8℃，如果要较长时间存放，可以放置在－20℃。
体液病原DNA提取试剂盒的产品特点：
1、不需要使用试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2、节省时间，简捷，单个样品操作一般可在几十分钟内完成。
3、多次柱漂洗确保高纯度，提取的病毒DNA纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种操作，包括PCR、酶切、杂交等。
体液病原DNA提取试剂盒组成成分：
1、裂解液DLB；
2、去蛋白液RE；
3、漂洗液WB；
4、洗脱缓冲液EB；
5、吸附柱AC；
6、收集管。
体液病原DNA提取试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的DNA。无需使用氯仿等抽提，特有的缓冲液/蛋白酶K体系能迅速裂解病毒，使病毒蛋白与DNA分离，在蛋白酶K的作用下降解病毒蛋白，在高盐状态下将DNA选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除蛋白等杂质，然后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的DNA从吸附柱膜上洗脱下来。
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