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成都瑞普信生物技术有限公司
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“做miRNA下调，QPCR检测miRNA，表达水平无变化”，这到底是怎么回事？现有miRNA抑制手段，无论是基于载体构建的、还是化学合成的，本质上都是用跟成熟体互补的反义miRNA（miRNA海绵体属于不完全互补的反义RNA重复），其可以通过结合miRNA，阻断其与靶基因结合，但并不能有效引发miRNA的降解，原因有两方面：其一是反义RNA与miRNA结合后，序列很短，导致Dicer酶（细胞内降解双链RNA的主角）不能有效结合；其二是miRNA与Ago2以RISC复合物的形式存在，该复合物也会导致Dicer酶无法高效结合。因此，如果以反义RNA技术抑制miRNA功能，QPCR可以做，如果检测出表达水平下降还好，即便未检测到，也不表示抑制无效，正确的做法是直接检测目的基因蛋白水平是否有上调。但若实验者不清楚靶基因的情况下，不检测到miRNA下调，心里是没底的。
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定量实时聚合酶链反应（qPCR）广用于特异性核酸的第三方检测，RNA转录物丰度的测量和高通量实验结果的验证。qPCR通常在标准的96孔板上进行，现在实验室里的qPCR就像移液器和烧杯那样常见。在引物设计和功能分析方面，NCBI里的数据已经很多了。但这些数据只是理论上的，在具体实验操作中还要经过各种复杂的计算和实验。在以前的qPCR中，为了使测定正常进行，通常需要进行大量耗时的反复试验。而现在，这些步骤都可以通过数据预实验来完成。更方便的是，已经有人把qPCR实验中所用到的各种工具都整合到了一个工具箱里。比如，Biosearch这个网站里，就有一个成套的qPCR工具箱OligoToolbox，其中包含的工具能做很多实验计算工作。成都瑞普信生物技术有限公司靠谱的第三方检测公司。云南流式第三方检测机构
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