抗病毒材料 药物代谢产物鉴定与代谢途径研究
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关 键 词：药物代谢产物鉴定与代谢途径研究
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发布时间：2022-03-14
病原微生物是指可以侵犯人体，在宿主中生长繁殖、释放毒性物质等引|起机体不同程度病理变化、发生感染的微生物，包括、病毒、、、衣原体、支原体等。
病原微生物检测——生化方法：
生化方法检测病原微生物实际上是测定微生物特酶。由于各种微生物所具有的酶系统不完全相同，对许多物质的分解能力亦不一致。因此可利用不同底物产生的不同代谢产物来间接检测该微生物内酶的有无，从而达到检测特定微生物的目的。如沙门氏菌能产生辛酯酶，这一性能是除沙门氏菌外的各属肠杆菌科所不具备的。该方法是以42甲基伞形酮辛酯(MUCAP)为底物，经沙门氏菌的酶降解后，释放出4MU，在紫外灯下观察其发出的蓝色荧光。该方法简便易行，从加入底物到紫外灯下观察到出结果仅需几分钟即可完成。其灵敏度和特分别可达95%和90%。对与H2 S(+)反应的沙门氏菌该法更为敏感，灵敏度和特均接近。大肠埃希氏菌具β2葡萄糖醛酸酶，但以O157:H7为代表的肠性大肠埃希氏菌(EHEC)却不具此酶，故β2葡萄糖醛酸酶阴性已成为初步筛查EHEC的重要特征。白色具脯氨酸肽酶及N2已酰β2D半乳糖苷酶，分别以合适的试剂检测，两酶均阳性即为白色。
病原微生物检测——分子生物学与*学相结合的方法：
1、*PCR：
*PCR(immuno polymerase chain reaction，IM PCR)是1992年Sano等[16]建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。该技术把抗原抗体反应的高特和聚合酶链反应的高敏感性**结合起来，它的基本原理是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针，用此探针与待测抗原反应，PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子，电泳定性，根据特PCR产物的有无，来判断待测抗原是否存在。目前，国内外报道的*PCR的敏感性一般比现行的EL ISA法高102～105倍。由于PCR产物在抗原量未达到饱和前与抗原抗体复合物的量成正比，因此*PCR还可用于抗原的半定量试验。
2、PCR2EL ISA：
PCR2EL ISA法是PCR与EL ISA技术结合的检测方法。其综合了PCR，分子杂交，和EL ISA 3种技术的优点。主要用于检测样品中的特定基因。它引入(或生物素)标记的dN TP或引物进行PCR扩增，利用酶标抗抗体(或酶标记亲和素)进行EL ISA检测，代替了用于常规PCR产物检测的电泳方法，方便快捷，易于处理大量样品，且其灵敏度比使用琼脂糖凝胶电泳检测方法高100倍，当有适当的标准品时，还可进行定量测定。
病原微生物检测——蛋白质指纹图谱技术：
蛋白质指纹图谱技术是随着蛋白质组学兴起的一种新技术，用于各种疾病特蛋白指纹的识别和判断，可以直接检测不经处理的尿液、血液或细胞裂解液等。人体血清里有成千上万个蛋白，人一旦发生了某种疾病，蛋白质成分就必然会起变化。该技术不是利用单的蛋白质峰的出现和消失来判断SARS，而是用5个蛋白质峰的出现和消失来判断，好比刑侦破案中甄别5个手指的指纹，故此称为“指纹图谱”。质谱仪通过复杂的计算能够记住SARS病人血清里蛋白质的图谱，通过对质谱仪的“训练”之后，它就能够根据人体血清中的特异变化，灵敏地辨别出测试的对象是否感染了SARS病毒。
这种检测方法经过检测，阳性率接近95%，特将近96%，能在病人发烧的天即可以得出满意的检测结果。只需要一滴血，将采集到的病人血样现场直接放到9mol浓度的尿素里，病毒可以迅速溶解灭活，这样在一般医院的化验室里即可实现安全操作，从而防止交叉感染。有称蛋白质指纹图谱技术标志着一种划时代的诊断模式的诞生。
病原微生物分类如下：
依病原微生物的性危险程度的大小，我国的菌种分为四类。
一类：实验室感染的机会多，感染后发病的可能性大，重并能危及生命，缺乏有效的预防方法，以及性强，对人群危害性大的烈，包括国内未发现或虽已发现，但无有效防治方法的烈菌种。
二类：实验室感染机会较多、感染后的较重及危及生命，发病后不易及对人群危害较大的病菌种。
三类：仅具有一般危险性，能引起实验室感染的机会较少，一般的微生物学实验采用一般实验技术能控制感染或有对之有效的*预防方法的菌种。
四类：生物制品、菌苗、疫苗生产用各种减毒、弱毒菌种及不属于上述，一、二、三类的各种低致病性的微生物菌种。
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