价格:面议
武汉友名生物技术有限公司
联系人:董先生
电话:18627191036
地址:湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701
如何评价和选择支原体检测试剂盒
1. 灵敏度。
灵敏度常用支原体基因组的拷贝数或支原体菌株的CFU表示。
2. 特异性和广谱性。
质量好的试剂盒应检测的支原体物种越多越多,并且特异性强,即只针对支原体,不针对其他细菌等微生物,没有交叉反应。
3. 稳定性。
冻干粉比液体试剂的稳定性高。
4. 样本类型及样本处理。
一款好的试剂盒,会标出它适合的样本类型,也会说明如何处理样本。要注意有的样本含有抑制PCR反应的物质,因此需要处理。
5. 对照品。
一个好的试剂盒,会带有阳性对照和内控对照。内控对照是用于监测PCR是否正常。如果样本含有抑制PCR的物质,则内控对照的条带会发生缺失。有严重支原体污染的样本由于样本中的支原体对内控对照产生了竞争性抑制,因此支原体条带越强,内控条带越弱
植物DNA的SDS提取法:1 取2-3g新鲜叶片,在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15ml离心管中。2 加入5ml于65℃预热的提取缓冲液,65℃水浴保温30min(摇动数次),使提取液与样品充分混合。3 加入2ml5mol/LKAc,剧烈振荡,冰浴保温20min以上。4 2700×g离心20min,将上清液倒入新的15ml离心管中,(若提取DNA用于Southern等实验,一般在转移上清时加滤膜,防止样品残渣混入,可保证DNA纯度)。5 加入4ml氯1仿/异戊1醇(24∶1),摇匀,平衡,2700×g离心15min。6 在另一新的15ml离心管中加入5ml预冷的异丙1醇,将上清液用移液转入此管,在-20℃冷却30min以上。7 2700×g离心10min,酵母RNA提取,弃去上清液,用4ml70%乙醇洗涤,室温保持10min。2700×g离心3min,倒去上清液。8 重复步骤7,用4ml70%乙醇洗涤,室温保持10min。2700×g离心3min,倒去上清液。**净工作台内吹干(3h左右)。9 加1mlTE缓冲液中溶解,加10μlRNase(10mg/ml),在37℃恒温箱中温育20min。10 再加100μl3mol/LNaAc和2ml无水乙醇,2700×g离心3min,倒去上清液。**净工作台内吹干(3h左右)。11 将DNA沉淀溶于150μlTE中,置于**净工作台内(3h左右)。将TE溶液转入已灭菌的1 5mleppendorf管中,-20℃保存备用。
tRNA二级结构
约50%碱基配对,形成四段双螺旋,与五段非配对序列形成三叶草形结构。
该结构中存在四臂四环:
①氨基酸臂。
②二氢尿C4H4N2臂(DHU臂、D臂)和二氢尿C4H4N2环(DHU环、D环),特征是含二氢尿C4H4N2(DHU、D)。
③反密码子臂和反密码子环,特征是反密码子环含反密码子。反密码子5′端与尿苷酸连接,3′端与piao呤核苷酸连接。TΨC臂(T臂)和TΨC环(Ψ环),特征是TΨC环含胸腺C4H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。
④额外环3~21nt。
tRNA三级结构呈L形,氨基酸结合位点位于其一端,反密码子环位于其另一端,DHU环和TΨC环虽然在二级结构中位于两侧,但在三级结构中却相邻。尽管各种tRNA的长度和序列不尽相同,但其三级结构相似,提示三级结构与其功能密切相关。