深圳基因扩增PCR检测实验室预算费用
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行 业:环保 净化工程
发布时间:2021-11-02
中净环球净化科技有限公司可提供PCR实验室、基因扩增实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
基因扩增实验又称 PCR实验,是用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒;由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特高、快捷、对样品要求低等优点,因此被广为认可,已广泛应用于的诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断;但是这种实验需要有能保证安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视,因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。
基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染,因此实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式,同时要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
标本污染主要有收集标本的容器被污染;标本存放运输时,由于密封不严或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;核酸模板在提取过程中,由于加样污染导致标本间污染;手动提取核酸样本时,污染的手套触摸离心管内盖导致的污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。一个正规的实验室,要时刻注意监测实验室的污染情况。了解实验室有无污染,污染原因,污染程度,以便采取有效措施,防止和消除污染,一般通过阴阳性对照检测污染情况。PCR阳性对照对于被建立PCR反应实验室及一般的检验单位都是必需设有的, PCR反应是否成功,PCR阳性对照是一个重要的参考标志;如果阴性对照和阳性对照均成立,说明质量控制成立,实验室未被污染,样本检测结果才有效;如果阴性对照不成立,出现扩增曲线,说明阴性对照被核酸污染,需要追溯污染源。
中净环球净化科技有限公司可提供PCR实验室、检测实验室、检验实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
进入各工作区域应当严格按照单一方向进行,即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→ 扩增产物分析区;各工作区域必须有明确的标记,不同工作区域内的设备、物品不得混用;不同的工作区域使用不同的工作服例如不同的颜色;工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出;实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行,不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染;工作结束后,必须立即对工作区进行清洁,实验台表面的紫外照射应当方便有效可移动紫外灯,254nm波长,在工作完成后调至实验台上60~90cm内照射。
试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在试剂储存和准备区 ,应当保存在标本处理区;由于在样本混合、核酸纯化过程中可能会发生气溶胶所致的污染,可通过在标本制备区内设立正压条件,避免从邻近区进入本区的气溶胶污染,为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必须盖好含反应混合液的反应管;必须注意的是所有经过检测的反应管不得在扩增区打开;须注意避免通过扩增产物分析区的物品及工作服将扩增产物带出。
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如**净工作台、离心机、加样器等。
中净环球净化科技有限公司可提供PCR实验室、核酸检测实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
实验室自配试剂去离子水、缓冲液等和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌;尖、反应管等实验耗材应一次性使用。实验应在**净工作台内进行,工作台内应放置PCR的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品;实验的过程中选择合适尺寸的手套并能及时更换,在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套,以避免不同实验区交叉污染;吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行,遵守“慢吸快打”原则,尽量一次性完成,忌多次抽吸,以避免气溶胶产生的交叉污染;装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心,将管壁及管盖上的液体离至管底,降低污染手套或加样器的风险;谨慎开启反应管,防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。
PCR试剂建议小量分装,以减少反复冻融、重复取样次数;多样本PCR反应时,先配制反应混合液分装至反应管中,后加入样本核酸,请勿同时开盖,尽量保证单人单管,实现完全闭管操作;实验试剂应与样品和PCR产物分开保存,不应放于同处;PCR扩增实验完成后及时将反应管取出,用一次性手套将产物反应管包裹丢弃,保证管盖紧闭。
PCR实验室的污染应急处理方法:暂停所有实验操作;清理实验室内所有物品,寻找污染来源;加大实验室的通风;对实验室内所有表面台面、地面及墙面进行消毒;75%酒精空中喷雾;开启紫外消毒装置,延长紫外照射时间4小时以上;以上措施每日进行,直至污染消除;用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测,连续3次均阴性后方可进行常规检测。
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试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染;可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品,可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。PCR实验室缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内;PCR实验室进风由原有中央空调控制,要求将中央空调风口安装到**,且高度为地面铺装好后2600mm处。
各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;**基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染,实验就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验结果必须作废,需重新进行实验;所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪费人力物力;因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除。
严格控制进出实验室的人员,与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置立的通道和进出整个实验区的门;尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性;扩增产物分析区是主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等。