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本公开特别涉及一种检测的试剂盒及方法。
背景技术：
：2019(sars-cov-2)，也称“”属于有包膜的β属，其遗传物质为单条正义rna链，该rna由表面布满刺突蛋白(sprotein)的蛋白质外壳包裹，这些刺突蛋白使具有高度性。具有人传人的能力，其传播途径包括呼吸道飞沫传播及接触传播、可透过直接接触带有病毒的分泌物，而且当前对于所致疾病没有特异方法，因此，有必要针对开发检测体系来满足需要。目前，快速检测的方法主要为利用试剂盒将病毒rna逆转录形成cdna后再进行荧光定量pcr，然而现有检测中存在较多假阴性的情况，其原因可能是试剂盒检测灵敏度低使得检测下限较高从而导致检测结果具有较高的假阴性率。技术实现要素：本公开有鉴于上述现有技术的状况而完成，其目的在于提供一种提高检测灵敏度的检测的试剂盒及方法。为此，本公开一方面提供了一种检测的试剂盒及方法，其包括：引物探针集，其包括针对的靶标基因设计的引物和针对的靶标基因设计的探针；缓冲液，其包括tris-hcl、、、甘油、硫酸铵、、吐温20和dntp，所述dntp为包括datp、dctp、dgtp和dutp的混合物；酶混液，其包括扩增酶、逆转录酶和尿嘧啶-n-糖基化酶，其中，所述tris-hcl的浓度为20至30mm，所述的浓度为2至3mm，所述的浓度为35至45mm，所述甘油的浓度为3％至7％，所述硫酸铵的浓度为25至35mm，所述的浓度为0.4至0.8m，所述吐温20的浓度为0.02％至0.05％，所述datp、所述dctp和所述dgtp的浓度分别为0.2至0.6mm，所述dutp的浓度为0.5至1mm。在本公开中，试剂盒利用针对的靶标基因设计的引物和探针进行检测，并通过改良缓冲液的成分比例来提高检测的灵敏度，而且能够利用尿嘧啶-n-糖基化酶与dutp形成防污染体系，进而能够有利于灵敏度的提升。另外，在本公开一方面所涉及的试剂盒中，可选地，在所述酶混液中，所述扩增酶的浓度为0.5至2u，所述逆转录酶的浓度为150至250u，所述尿嘧啶-n-糖基化酶的浓度为0.2至1.2u，并且所述扩增酶为热启动taq酶，所述逆转录酶为核糖核酸酶h活性缺失的mmlv逆转录酶。由此，能够提高扩增效率，并且能够有效减少污染。另外，在本公开一方面所涉及的试剂盒中，可选地，所述引物探针集包括针对的开放读码框1ab设计的引物对和探针，所述引物对包括核苷酸序列为seqidno:1的上游引物和核苷酸序列为seqidno:2的下游引物，所述探针的核苷酸序列为seqidno:3，所述探针标记有荧光基团。在这种情况下，试剂盒具有针对基因组中高度保守且特异的开放读码框1ab区域设计引物和探针，由此能够特检测。另外，在本公开一方面所涉及的试剂盒中，可选地，所述引物探针集还包括针对的核壳蛋白基因设计的*二引物对和*二探针，所述*二引物对包括核苷酸序列为seqidno:4的*二上游引物和核苷酸序列为seqidno:5的*二下游引物，所述*二探针的核苷酸序列为seqidno:6，所述*二探针标记有不同于所述探针的荧光基团。在这种情况下，试剂盒具有针对基因组中相对保守的核壳蛋白基因设计引物和探针，由此能够有利于提高试剂盒检测的特。另外，在本公开一方面所涉及的试剂盒中，可选地，所述引物探针集包括针对内标基因设计的*三引物对和*三探针，所述*三引物对包括核苷酸序列为seqidno:7的*三上游引物和核苷酸序列为seqidno:8的*三下游引物，所述*三探针的核苷酸序列为seqidno:9，所述*三探针标记有荧光基团，所述内标基因为。由此，能够监测试剂盒所检测的待测样本的质量，减少样本浓度过低导致的假阴性现象，从而能够进一步提高试剂盒检测的灵敏度。另外，在本公开一方面所涉及的试剂盒中，可选地，所述上游引物的浓度为0.25至0.35mm，所述下游引物的浓度为0.25至0.35mm，所述探针的浓度为0.05至0.15mm。由此，能够有利于提高特扩增的效率。另外，在本公开一方面所涉及的试剂盒中，可选地在所述反应液中，所述*二上游引物的浓度为0.25至0.35mm，所述*二下游引物的浓度为0.25至0.35mm，所述*二探针的浓度为0.2至0.3mm。由此，能够有利于提高特扩增的效率。另外，在本公开一方面所涉及的试剂盒中，可选地，所述*三上游引物的浓度为0.25至0.35mm，所述*三下游引物的浓度为0.25至0.35mm，所述*三探针的浓度为0.2至0.3mm。由此，能够有利于提高特扩增的效率。另外，在本公开一方面所涉及的试剂盒中，可选地，还包括含有靶标基因假病毒的阳性质控品和含有内标基因假病毒的阴性质控品。由此，能够有助于检测过程，从而能够有利于减少假阴性的情况发生。本公开另一方面提供了一种检测的方法，其包括准备待测样本并使用上述任一项所述的试剂盒进行扩增。在这种情况下，利用该试剂盒进行检测能够有效提高检测灵敏度。根据本公开能够提供一种提高检测灵敏度的检测的试剂盒及方法。附图说明图1是示出了本公开的示例所涉及的检测的方法的流程示意图。具体实施方式以下，参考附图，详细地说明本公开的优选实施方式。在下面的说明中，对于相同的部件赋予相同的符号，省略重复的说明。另外，附图只是示意性的图，部件相互之间的尺寸的比例或者部件的形状等可以与实际的不同。在本公开中，检测的试剂盒可以简称为“试剂盒”。另外，本公开所涉及试剂盒可以在核酸水平上检测。在一些示例中，对于本公开所涉及试剂盒的使用，可以将引物探针集和缓冲液混合形成反应液，并将反应液与酶混液按照特定比例混合形成预混液，再将预混液与待测样本按照预定比例混合形成反应体系以进行实时荧光反转录扩增。在一些示例中，使用本公开所涉及试剂盒进行检测时，可以以待测样本中的rna为模板逆转录形成cdna链，然后以cdna链为模板合成cdna*二链而形成双链cdna(以下简称cdna)，接着以cdna为模板进行实时荧光定量pcr，而实现对的核酸检测。在本公开中，试剂盒中各组分的浓度可以是指各组分在反应体系中的工作浓度。另外，单位“m”可以是mol/l的缩写，单位“u”可以是指u/ul。在本实施方式所涉及的检测的试剂盒，其可以包括引物探针集、缓冲液和酶混液。其中，酶混液可以包含扩增酶、逆转录酶和尿嘧啶-n-糖基化酶。另外，引物探针集可以包括针对的靶标基因设计的引物和针对的靶标基因设计的探针，也即引物探针集可以包括针对基因组中的靶标基因设计的引物和探针。在一些示例中，缓冲液可以包括tris-hcl、、、甘油、硫酸铵、、吐温20和dntp。另外，dntp可以为包括datp、dctp、dgtp和dutp的混合物。在一些示例中，tris-hcl的浓度可以为20至30mm，的浓度可以为2至3mm，的浓度可以为35至45mm，甘油的浓度可以为3％至7％，硫酸铵的浓度可以为25至35mm，的浓度可以为0.4至0.8m，吐温20的浓度可以为0.02％至0.05％，datp、dctp和dgtp的浓度分别可以为0.2至0.6mm，dutp的浓度可以为1至1.5mm。在本实施方式中，试剂盒利用针对的靶标基因设计的引物和探针进行检测，并通过改良缓冲液的成分比例来提高检测的灵敏度，而且能够利用尿嘧啶-n-糖基化酶与dutp形成防污染体系，进而能够有利于灵敏度的提升。在一些示例中，引物探针集和缓冲液可以混合形成反应液。其中，引物探针集可以提供引物和探针，例如，引物探针集可以包括针对设计的引物和探针。在一些示例中，引物探针集可以包括针对的开放读码框1ab(orf1ab)设计的引物对和探针。在这种情况下，试剂盒具有针对基因组中高度保守且特异的开放读码框1ab区域设计引物和探针，由此能够特检测。也就是说，可以以orf1ab区域作为的靶标基因。在一些示例中，引物对可以包括上游引物和下游引物。在另一些示例中，上游引物的核苷酸序列可以为seqidno:1，下游引物的核苷酸序列可以为seqidno:2。