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低温生物菌种——菌种分离方法介绍
孢子分离又可分为以下几种方法：
( 1 ）褶上涂抹法：选取新鲜、健壮、未开伞、未裂破的子实体，洗净后用75 %酒精表面灭菌2 分钟，然后连同培养基一起放入接种箱内，经熏蒸消毒12 ～ 24 小时，再按无菌操作技术将接种环在子实体菌褶上涂抹，把涂抹后带孢子的接种环在培养基上划线接种，后置于25 ～ 28 ℃恒温箱内培养，可得纯菌种。
( 2 ）孢子印采集法：取灭过菌的载玻片、试纸或黑布，置于新鲜、未开伞或未开裂的子体菌褶的下方。经24 小时后，便落下孢子，形成印痕（即孢子印）。然后，用接种环或玻璃棒蘸取孢子，接种在平面或斜面培养基上，进行恒温培养，可得纯菌种。
( 3 ）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃钟罩、培养皿、三角架、搪瓷盘等组成。钟罩下为一搪瓷盘，直径25 厘米左右，盘内先垫衬4～6 层纱布，*放1 副9 厘米直径的培养皿，大盖口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培养皿上放1 只铅丝绕成的三角架，低温生物菌种多少钱，再将带孔的玻璃钟罩盖上，**上罩孔用棉塞塞好，用纱布包好整个孢子收集器，置于高压灭菌锅或蒸笼内灭菌2小时。
孢子收集器灭菌消毒后，放入无菌室或无菌箱内。然后，用小刀割取1 块4～5 厘米大小的子实体，插在收集器内的三角架**上（若无孢子收集器，也可用培养皿代替）。再置于温度24 ～26 ℃下培养24 小时，培养皿中便可见到白色粉状物，此即为孢子。此时，可将孢子收集器再移至接种箱内，低温生物菌种，取出培养皿，盖好，并在培养皿内加入10 ～ 20 毫升的无菌水，使孢子散于本中，成为孢子悬浮液。然后，再用无菌打针筒或吸管吸取孢子悬浮液，接种于试管斜面培养基上，每管注2 ～ 3 滴。置于24 ～ 26 ℃温度下培养5 ～ 7 天，培养基上便可长出白色菌落。待菌落直径有0 . 5 厘米时，低温生物菌种报价，选健壮的菌落，再移接于另一试管的斜面培养基上培养。当白色菌丝长满试管时，便得纯菌种。
低温生物菌种的筛选分离
筛选
工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛，挑选具有某种能力的有用菌种。
分离
首先是从土壤或腐生植物中收集含菌样品，用无菌水稀释后，涂布于置有适宜细菌或霉菌生长的琼脂培养基平皿上，并将其倒置于恒温箱中，培养一定时间，平皿上长出的许多单个菌落（单一微生物的集落）经分别分离后即为各种纯种菌株，简称纯种，移种至试管斜面培养基上，置4℃冰箱备用。
低温生物菌种的保存方法
低温保存法
①简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存，保存时间不**过1～2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡，以隔绝外界空气和水汽，保持时间可达3～4个月；
②液氮**低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，低温生物菌种生产厂，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。