价格：面议
武汉友名生物技术有限公司
联系人：董先生
电话：18627191036
地址：湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701
在选用支原体PCR法检测来替代药典方法时，需要考虑如下两个方面：
首先一步是要使用符合欧洲药典要求，经过全方面验证的支原体检测试剂盒，*二部是自我验证，即确认所用的样本基质对于该试剂盒方法是合适的，并且操作过程是正确的。小规模的室内验证通常需要采用三个不同批次的试剂盒，然后加入10CFU的标准品，做复孔（通常是8个复孔），并且至少选择3个支原体物种进行验证。
有的支原体标准品厂家会提供CFU与基因拷贝数的比值，以方便二者的换算。因为10CFU只能确定PCR能够达到的检测限在10CFU以下，但无法具体确定灵敏度的数值。带DNA拷贝数标定的基因组DNA标准品则可进一步确定检测限的数值。
总之，PCR方法很有用，但需要避免假阴性，验证时应使用阳性对照、阴性对照、无模板对照和内控对照，以保证PCR反应正常，以及支原体少量存在时确实能检出来，支原体不存在时也确保是结果阴性，从而使得PCR方法在工业应用时能确保zui终结果的可靠。
从动物组织中提取基因组DNA
使用研钵进行匀浆时：
① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中，快速用力展研成匀浆。注）下列组织请加液氮研磨至粉末状。
A．富含DNA酶的胰脏、脾1脏、胸腺、淋巴等组织。
B．富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。
C．富含角质蛋白的组织或坚硬的组织（如骨骼）等。
② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，温和研磨30秒钟。注）使用上述①-注）的实验材料时，请在加入Solution A及RNase A1后，将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。
③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl，65℃保温5分钟。
使用研磨棒进行匀浆时:
① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊状。
② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。
③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中，充分振荡混合后，65℃保温5分钟。
水中微生物DNA提取试剂盒，样本制备步骤。
步骤1. 样本过滤
1.1 从试剂盒中小心取出滤膜。用水样润湿滤膜。
1.2 将滤膜放置在滤器中，并过滤必要体积的水样。
步骤2. 菌体裂解
* 提前准备：预先将恒温仪设置到70℃，RNA试剂盒价格，将恒温箱设置到37℃。
2.1将样本过滤后的滤膜翻转放置到试剂盒提供的IncubationDish（平皿）中。
2.2 吸取2mllysis buffer（裂解液），并加到滤膜上。
2.3 将滤膜浸泡在裂解液中，小心摇匀平皿并在37°C孵育30分钟。
2.4 用平皿中的裂解液冲洗滤膜，并摇晃平皿10秒钟。
2.5 将平皿中的400μl裂解液转移至IncubationTube（孵育管），70°C孵育10分钟。
2.6 样本短暂离心，并加入400μl Binding Buffer（结合液），立即涡旋充分混匀，以防止DNA沉淀。请勿离心样本，并立即进行下一步。
步骤3. DNA提取
3.1 将步骤2.6中的混合液（~800μl）转移到CollectionTube（收集管）内的SpinColumn（离心柱）中，小心液体不要沾到离心柱的边缘。
3.2 离心柱离心≥10000× g，1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。
3.3 离心柱中加入500μl洗液1。离心≥10000×g，1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。
3.4 离心柱中加入500μl洗液2。离心≥10000×g，1分钟。弃掉收集管中的液体。将离心柱插到一个新的收集管中。
3.5 zui大速度离心3分钟，以去除残留的洗液2。
3.6 弃掉收集管。
3.7 吸取60μl已70℃预热的洗脱液，直接加到离心柱的硅胶膜上。硅胶膜表面应全部覆盖洗脱液。
3.8 室温静置2分钟，然后离心8000×g，2分钟，以洗脱DNA。
3.9 样本保存管中的洗脱液即包含DNA，可直接用于PCR，或储存在2~8℃，可存放1周。长期储存是在≤-18℃。
