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行 业：化工 化工机械设备 化工反应设备
发布时间：2020-11-28
高效液相色谱
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用 [1] 。
中文名 高效液相色谱 外文名 High Performance Liquid Chromatography 又 称高压液相色谱 概念提出茨维特
目录
1 历史
2 特点
3 类型
4 结构
? 组成
? 技术动态
? 高压输液泵
? 色谱柱
? 进样器
? 馏分收集器
? 数据
5 分离原理
? 液-液分配
? 液—固
? 离子交换
? 离子对
? 离子
? 空间排阻
6 流程
7 相关术语
8 色谱柱
9 测定
? 综述
? 相对分子质量
? 溶解度
? 化学结构
10 设备
? 综述
? 高压泵
? 梯度洗脱
? 进样装置
? 色谱柱
? 检测器
11 正反色谱
12 实例
13 液相色谱理论
历史编辑
1903年俄国植物化学家茨维特（Tswett）首次提出“色谱法”（Chromatography）和“色谱图”（Chromatogram）的概念。茨维特使用色谱法 chromatography （来自希腊字， chroma 意思是颜色， graphy 意思是记录 - 直译为颜色记录）来描述他的彩色试验。（令人好奇的是, 俄罗斯名字茨维特意思是颜色。）他在论文中写到：
“（原文）一植物色素的溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图。”
1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。
1952年，英国学者Martin和Synge 基于他们在分配色谱方面的研究工作，提出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论和方法，把色谱技术向前推进了一大步，这是气相色谱在此后的十多年间发展十分迅速的原因。
1958年，基于Moore和Stein的工作，离子交换色谱的仪器化导致了氨基酸分析仪的出现，这是近代液相色谱的一个重要尝试，但分离效率尚不理想。
1960年中后期，气相色谱理论和实践发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。
1970年中期以后，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了仪器的自动化水平和分析精度。
1990年以后，生物工程和生命科学在国际和国内的迅速发展，为高效液相色谱技术提出了更多、更新的分离、纯化、制备的课题，如人类基因组计划，蛋白质组学有HPLC作预分离等。
特点编辑
高效液相色谱法有“四高一广”的特点：
高效液相色谱
高效液相色谱(2张)
①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
③高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。
⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
⑥柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物
⑦样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显着地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。
类型编辑
1．吸附色谱法(Adsorption Chromatography)
2．分配色谱法(Partition Chromatography)
3．离子色谱法(Ion Chromatography)
4．分子排阻色谱法/凝胶色谱法(Size Exclusion Chromatography)
5．键合相色谱法（bonded-phase chromatography）
6．亲和色谱法(Affinity Chromatography)
结构编辑
组成
可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。
技术动态
液相色谱和质谱连接，可以增加额外的分析能力，能够准确鉴定和定量像细胞和组织裂解液，血液，血浆，尿液和口腔液等复杂样品基质中的微量化合物。高效液相色谱质谱系统（ABSciex Eksigent LC / MS和LC / MS / MS）提供了一些独特的优势，包括：
快速分析和流转所需的少样品准备
高灵敏度并结合可分析多个化合物能力，甚至可以跨越化合物的种类
高精确度，高分辨率鉴定和量化目标分析物
高压输液泵
功能
驱动流动相和样品通过色谱分离柱和检测系统；
性能要求
流量稳定（±1)，耐高压(30～60Mpa)，耐各种流动相：例如：有机溶剂、水和缓冲液；
种类
往复泵和隔膜泵。
色谱柱
功能
分离样品中的各个物质；
尺寸
10～30cm长，2～5mm内径的内壁抛光的不锈钢管柱；
填料粒度
5 ～10μm ，高效微粒固定相；
进样器
功能
将待分析样品引入色谱系统；
种类
①注射器，10Mpa以下，1～10μm微量注射器进样
②停流进样
③阀进样，常用、较理想、体积可变，可固定
④自动进样器，有利于重复操作，实现自动化
检测器
功能
将被分析组在柱流出液中浓度的变化转化为光学或电学信号；
分类
①示差折光化学检测器
②紫外吸收检测器
③紫外-可见分光光度检测器
④二极管阵列紫外检测器
⑤荧光检测器
⑥电化学检测器
馏分收集器
功能
如果所进行的色谱分离不是为了纯粹的色谱分析，而是为了做其它波谱鉴定，或获取少量试验样品的小型制备，馏分收集是必要的；
方法
①手工，少数几个馏分，手续麻烦，易出差错。
②馏分收集器收集，比较理想，微机控制操作准确。
数据
获取与处理功能
把检测器检测到的信号显示出来。
实验仪器，是指在没有现成的商品化仪器可供购买，或虽买得到但买不起的情况下，寻找相关材料自行研制和制作符合教学要求的实验仪器。其意义主要在于：①过渡性地解决仪器资源不足，及原有旧仪器与新课程新教材匹配不良等问题，为全面有效地展开实验教学提供条件空间；②也为开发出工业化商品化仪器创造条件雏形；③培养学生的创新精神和实践能力。学生的教具（学具）活动，是物理实验教学活动的一种形式，是物理实验教学活动的重要组成部分。
实验仪器
可以培养的学生的动手能力和想象力
教具的制作过程是一个学生动脑的过程，从初步在脑海里构想，动手设计，再到中间过程的反复考量修改都需要自己的思考才能进行下一步地制作，到后完成中间的经历其实就是一个发现问题，解决问题的过程，既锻炼了学生的动手能力同时也是学生养成积极思考的好习惯。这一过程不仅使所学知识得到了巩固和运用，更重要的是使学生的思维能力、动手能力、创造能力得到了培养。教具的这种功能，是任何现成仪器所不具备和不能代替的。
教具是素质教育的一个重要体现
素质教育就是要求学生全面发展，要激发学生的个体的优势以改变应试教育同一化的模式，是每个学生的个体优势突显出来。而且实验仪器的过程是一个学生猎奇的过程，只有兴趣才会激发学生的兴趣，使枯燥的知识变为生动有趣的劳动课的模式。而且在学具制作过程中会经历失败的苦恼和通过不懈的努力获得终成功的喜悦。这对于促进学生非智力因素的发展和心理素质的增强，都起着十分重要的作用。同时，对于学生科技意识的培养，也是十分重要的。这种教育功能，也是任何现成仪器所不具备和不能替代的。
能有效培养学生的学习主动性
着名物理学家麦克斯韦说过“实验的教育价值与仪器的复杂性成反比，学生的仪器，虽然经常出毛病，但却会比用仔细调节好的仪器能学到更多的东西”。在中学实验室里教学仪器数量有限，使用一般都强调要按步骤操作，如果非正常损坏，则要赔偿，甚至罚款。因此，学生普遍存在害怕心理，使用时小心谨慎，不敢越雷池一步。学生处于被动实验状态，学习的积极性和主动性受到了压制。而教具取材容易，制作简单，损坏了可以再制作，这是商品仪器无法比拟的，它能有效地提高了学生学习的积极性、主动性。另外，学生通过的教具，能加深对教材内容的深入理解。
还可以解决在教育经费上问题
教育既能受到学生的欢迎，又能收到学校的欢迎因为的实验仪器可以在成本上，利用工业边角料和日常生活废旧品制作或改制成有用的教具，自然就会成为低成本教具或称为廉价教具。在教育经费不足的情况下，可以弥补教具经费之不足。
经纬仪的结构（主要常用部件）：
1. 望远镜制动螺旋 2. 望远镜 3. 望远镜微动螺旋 4.水平制动 5. 水平微动螺旋 6. 脚螺旋 9. 光学瞄准器 10.物镜调焦 11.目镜调焦 12. 度盘读数显微镜调焦 13. 竖盘指标管水准器微动螺旋 14. 光学对中器 15.基座圆水准器 16.仪器基座 17. 竖直度盘 18. 垂直度盘照明镜 19. 照准部管水准器20. 水平度盘位置变换手轮
望远镜与竖盘固连，安装在仪器的支架上，这一部分称为仪器的照准部，属于仪器的上部。望远镜连同竖盘可绕横轴在垂直面内转动，望远镜的视准轴应与横轴正交，横轴应通过水盘的刻画中心。照准部的数轴（照准部旋转轴）插入仪器基座的轴套内，照准部可以作水平转动。
分类/经纬仪
经纬仪根据度盘刻度和读数方式的不同，分为游标经纬仪，光学经纬仪和电子经纬仪。目前我国主要使用光学经纬仪和电子经纬仪，游标经纬仪早已淘汰。
电子经纬仪
光学经纬仪
光学经纬的水平度盘和竖直度盘用玻璃制成，在度盘平面的周诶边缘刻有等间隔的分划线，两相邻分划线间距所对的圆心角称为度盘的格值，又称度盘的小分格值。一般以格值的大小确定精度，分为：
DJ6 度盘格值为1° DJ2 度盘格值为20′ DJ1 （T3）度盘格值为4′
按精度从高精度到低精度分：DJ0.7,DJ1,DJ2,DJ6,DJ30等（D,J分别为大地和经纬仪的首字母）
经纬仪是测量任务中用于测量角度的精密测量仪器，可以用于测量角度、工程放样以及粗略的距离测取。整套仪器由仪器、脚架部两部分组成。
应用举列(已知A、B两点的坐标，求取C点坐标)：
是在已知坐标的A、B两点中一点架设仪器（以仪器架设在A点为列），完成安置对中的基础操作以后对准另一个已知点（B点），然后根据自己的需要配置一个读数1并记录，然后照准C点（未知点）再次读取读数2。读数2与读数1的差值既为角BAC的角度值，再精确量取AC、BC的距离，就可以用数学方法计算出C点的精确坐标。
一些建设项目的工地上，我们会经常看到一些技术人员架着一台仪器在进行测量工作，他们所使用的仪器就是经纬仪。经纬仪初的发明与航海有着密切的关系。在十五 十六世纪，英国、法国等一些发达，因为航海和战争的原因，需要绘制各种地图、海图。早绘制地图使用的是三角测量法，就是根据两个已知点上的观测结果，求出远处第三点的位置,但由于没有合适的仪器，导致角度测量手段有限，精度不高，由此绘制出的地形图精度也不高。而经纬仪的发明，提高了角度的观测精度，同时简化了测量和计算的过程，也为绘制地图提供了更精确的数据。后来经纬仪被广泛地使用于各项工程建设的测量上。经纬仪包括基座、度盘（水平度盘和竖直度盘）和照准部三个部分。基座用来支撑整个仪器。水平度盘用来测量水平角。照准部上有望远镜、水准管以及读数装置等等。
应用/经纬仪
经纬仪是望远镜的机械部分，使望远镜能指向不同方向。经纬仪具有两条互相垂直的转轴，以调校望远镜的方位角及水平高度。此类架台结构简单，成本较低，主要配合地面望远镜（大地测量、观鸟等用途）使用，若用来观察天体，由于天体的日周运动方向通常不与地平线垂直或平行，因此需要同时转动两轴并随时间变换转速才能追踪天体，不过视场中其它天体会相对于目标天体旋转，除非加上抵消视场旋转的机构，否则不适合用于长时间曝光的天文摄影。
应用举列(已知A、B两点的坐标，求取C点坐标)：
是在已知坐标的A、B两点中一点架设仪器（以仪器架设在A点为例），完成安置对中的基础操作以后对准另一个已知点（B点），然后根据自己的需要配置一个读数1并记录，然后照准C点（未知点）再次读取读数2。读数2与读数1的差值既为角BAC的角度值，再精确量取AC、BC的距离，就可以用数学方法计算出C点的精确坐标。
方法/经纬仪
一、赤经及赤纬在茫茫大海中，航行的船只遇到危险，求急救时，就是要让救援的人知道船只的所在处，也就是说要将船只所在的经纬度告知救援的人。经纬度不仅能在海洋上指出船只的位置。它的大好处是能将一个物体的确实位置，很简洁地让大家都能明了。同样的，在无际无涯的夜空星海中，一旦发现了新的星体，你如何将它的正确位置，公诸于世呢？你是否想到应该有一种类似经纬度的度量系统，来标定星球位置，制作星图呢？天文学家所使用的度量系统是赤经（Rightascension）及赤纬（Declination），赤纬的单位是度（Degrees），赤经单位是时（Hours）、分（Minutes），我们对这些也许并不熟悉，但要了解也并不难。
由于星辰距我们甚远，单靠眼睛实在辨别不出它们之间的远近差别，因此这些星球在我们看来都好像同样远近。我们就假想有一悬空之球壳罩住了整个地球，这个假想的球就叫做天球（Celestialsphere），而这些星星就固定在球壳内面，每次我们只能看到半个球面。因为地球自转的结果，天球便好像由东至西不断地绕着我们旋转，而天球北（南）极恰在地球地理北（南）极的正上空，天球赤道也恰在地球赤道的正上空，即位在二天极的。像地球一样，我们将天球刻划上了经纬度，在天文学中这相当于地球纬（经）度的，便叫做赤纬（赤经）。从天极到天球赤道间，赤纬共分90°；而赤经共分24时，1时又分60分，即1h=60m=15°，这是因为地球或天球每小时旋转15°而得名。这套决定天置的方法，看起来相当复杂，但是它有许多好处。例如，天球不断旋转，所以星星的视位置不断改变，像是由东至西横过夜空；同时，又因地球公转结果，虽在同一时刻，隔几天后，星星位置也稍稍偏西；或是你由北向南行走时，星星对地平线之相对位置，也都有所改变。既然星星之视位置，如此善变，故要依照所见来说明其位置，是相当困难的，只能借着赤经、赤纬来说明了，因为每一个星球恰与一组赤经纬度相对应。但也由于星象瞬息万变，到底应如何去测量其赤经及赤纬呢？二、经纬仪之制作经纬仪（Theodolite）是用来量度赤经、赤纬的，它是一种具有许多天文望远镜特性的观测装置。介绍一种简单的经纬仪做法，所须材料列于表一，各材料之尺寸大小仅供参改，可自斟酌，但各零件之相关位置必须弄清。制作之前先看看图1，图2，图3，及作法：1.用厚(3/8)"之三夹板，锯下二个圆盘，直径比量角器（分度器）稍大约(1/2)"即可。以强力胶在每一圆盘上，黏上二块量角器，量角器底边中点，须确实黏在圆盘中心上。（见图2）。2.把一个圆盘用二根螺丝钉，固定在D上，圆盘之圆心与90°之连线，必须与D之中线重叠，在D之两端各钉上一个螺丝圈，（注意不是钉在有圆盘的那一面，见图2）视线便可通过两个小圈观察。3.在另一圆盘圆心处，凿一(1/4)"的洞，这洞要同时穿过A、C，（见图3），用一螺丝穿过栓好，调整一下松紧程度，使C很容易旋转。4.从附于D之量角器圆心凿洞，以木栓或螺丝将D、C旋紧。但D、C间要能转动，不要固定。5.用铁片截取三个三角形，以螺丝钉或小钉子将它们附于C上，三角形之必须平贴于量角器上。6.以铰链将A、B接好。（见图1）7.G、H上距一端(3/4)"处凿一小洞，距此洞1"处起，沿每一木绦之中线，凿一宽(3/16)"之细缝，直到距另一端1"处。在小洞处以螺丝钉将G、H栓在A之二边，再用座钻通过细缝将G、H栓在B之边上，这是用来调整角度x的。钉螺丝或座钻时，应钉在适当位置，以致当调整至细缝末端时，A、B能够重合。经纬仪这时便可使用了。三、经纬仪之使用将经纬仪支在架子上，像椅子、像机三角架均可，目的只在使视线容易通过D之螺丝圈观察。把经纬仪面向南方放好，首先视臂D不要举起，（即纬度表E指在零），调整B板之倾斜，使视线沿视臂看到地平线，将B板固定在这位置，此时B板即保持水平，现在旋转C、D观察天体，则E即指示出天体之地平纬度（Altitude）。现在将经纬仪A板举高至x角，x=90°－（测量地之纬度），例如，你在台北测量，纬度大约25°3'，角x就等于64°57'；另一个法子是将视臂指向北极星，D保持在这方向，而A板，使纬度表E之读数为90°，此时A板即与B成x角了，当然你稍微想想便知道，可用这种方法来测量你所在地的纬度了，为什么这样子A与B就成x角呢？（注一）仰望天极（即北极星处）时仰角即为你的纬度，因此当E读数为零时，将板A举起x角后，视臂即指向天球赤道，为什么？（注二）调整x角之目的，在于求得星星对天球赤道面之仰角（即赤纬度），而不须顾虑到因观测地之纬度不同，所引起之星星视位置之变化。此时由西至东旋转视臂，便画出了天球赤道位置。为了测度赤经，你必经将经度表F刻成赤经单位——时，每隔15°为1时，由零度起反时针方向刻。现在视臂注视南天之一已知星，从星图、天文日历或其它参考星源，决定此星之赤经、赤纬，旋转经度表F，使C之指针指向适当之赤经值。此时纬度表应即自动指在了正确的赤纬值，否则仪器便有了偏差。将F固定住，现在旋转C、D，把视臂指向另一星球，此时从E、F就可读出，此星球之赤纬度、赤经度了。在天球赤道以北之星球赤纬度为正，在天球赤道以南之星赤纬度为负，即E盘上朝开口处之量角器度数为正，另一个为负。例如：角宿大星（Spica），在四、五、六月夜空均可见，它的赤经度(R.A.)=13h23m37s，赤纬度(D.)=-11°00'19''，将视臂指向角宿大星，此时纬度表E读数应约为-11°，调整经度表F至13h23m37s。现在旋转视臂D，注视轩辕大星（Regulus），此时在E上就可读出约12°06'，F上约10h07m，于是知道轩辕大星之R.A.=10h07m，D.=12°06
液相色谱
液相色谱是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中．为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。
中文名 液相色谱 外文名 liquid chromatography 目 的 分离与分析 组 成 流动相，固定相 分 类 纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱 固定相形式 如纸、薄板和填充床等
目录
1 简介
2 液相色谱类型
? 吸附色谱法
? 分配色谱法
? 离子交换色谱
? 凝胶色谱法
3 液相色谱与气相色谱的比较
4 高效液相色谱法介绍
? 基本原理
? 高效液相色谱仪的构造
? 高效液相色谱的应用
简介
液相色谱是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中．为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。
经典液相色谱的流动相是依靠重力缓慢地流过色谱柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分离后的样品是被分级收集后再进行分析的，使得经典液相色谱不仅分离效率低、分析速度慢，而且操作也比较复杂。直到20世纪60年代．发展出粒度小于10μm的高效固定相，并使用了高压输液泵和自动记录的检测器，克服了经典液相色谱的缺点，发展成高效液相色谱，也称为高压液相色谱。
液相色谱类型
液相色谱按其分离机理，可分为四种类型。
吸附色谱法
吸附色谱法的固定相为吸附剂，色谱的分离过程是在吸附剂表面进行的，不进入固定相的内部。与气相色谱不同，流动相(即溶剂)分子也与吸附剂表面发生吸附作用。在吸附剂表面，样品分子与流动相分子进行吸附竞争，因此流动相的选择对分离效果有很大的影响，一般可采用梯度淋洗法来提高色谱分离效率。
在聚合物的分析中，吸附色谱一般用来分离添加剂，如偶氮染料、抗氧化剂、表面活性剂等，也可用于石油烃类的组成分析。
分配色谱法
这种色谱的流动相和固定相都是液体，样品分子在两个液相之间很快达到平衡分配，利用各组分在两相中分配系数的差异进行分离，类似于萃取过程。
一般常用的固定液有β,β'-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEG400～4000)、三甲撑乙二醇(TMG)和角鲨烷(SQ)。采用与气相色谱(GC)同样的方法，将固定液涂渍在多孔的载体表面，但在使用中固定液易流失。目前，应用较多的是键合固定相。在这种固体相中，固定液不是涂在载体表面，而是通过化学反应在纯硅胶颗粒表面键合上某种有机基团。
例如，利用氯代十八烷基与硅胶表面的羟基(-OH)之间的反应就可以形成一烷基化表面。这种固定液的优点是不易被流动相剥蚀。在分配色谱法中，流动相可为纯溶剂，也可以采用混合溶剂进行梯度淋洗，其极性应与固定液差别大一些，以避免两者之间相溶。通常可分为正相分配和反相分配，如图1所示。
图1 分配色谱的分配类型
图1 分配色谱的分配类型
离子交换色谱
离子交换色谱通常用离子交换树脂作为固定相。一般是样品离子与固定相离子进行可逆交换，由于各组分离子的交换能力不同，从而达到色谱的分离。
离子交换色谱法是新发展起来的一项现代分析技术，已广泛用于氨基酸、蛋白质的分析，也适合于某些无机离子(NO3-、SO42-、Cl-等无机阴离子和Na+、Ca2+、Mg2+、K+等无机阳离子)的分离和分析，具有十分重要的作用。
凝胶色谱法
目前，凝胶色谱法既适用于水溶液的体系，又适用于有机溶剂的体系。当所用的洗脱剂为水溶液时，称为凝胶过滤色谱，其在生物界的应用比较多；采用有机溶剂为洗脱剂时，称为凝胶渗透色谱，在高分子领域应用较多。
上述的四种不同类型的液相色谱．可以依据样品性质的不同，选择不同的方法，如图2所示 [1] 。
图2 液相色谱方法选择
图2 液相色谱方法选择
液相色谱与气相色谱的比较
液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致，但由于在液相色谱中以液体代替气相色谱中气体作为流动相，而液体和气体的性质不相同。此外，液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同，所以，液相色谱与气相色谱有一定的差别。
主要有以下几力‘面：
①操作条件及应用范围不同
对于气相色谱，是加温操作。仅能分析在操作温度下能汽化而不分解的物质，对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难，致使其应用受到一定程度的限制，据统计只有大约20%的机物能用气相色谱分析。而液相色谱是常温操作，不受样品挥发度和热稳定性的限制，它非常适合相对分子量较大，难汽化，不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物和高聚物的分离分析，大约占有机物的70%~80%。
②液相色谱能完成难度较高的分离工作
a.气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，基本不参与分配平衡过程，与样品分子无亲和作用，样品分子主要与固定相相互作用。而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了一个因素。也可选择不同比例的两种或两种以上的液体做流动相，增加分离的选择性。
b.液相色谱固定相类型多，如离子交换色谱和排阻色谱等，作为分析时，选择余地大；而气相色谱并不可能。
c.液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般有利于色谱分离条件的选择。
③由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而在气相色谱中，由色谱柱外区域引起的扩张可以忽略不计。
④液相色谱中，制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备，但液相色谱尚缺乏通用的检测器，一起比较复杂，价格昂贵。在实际应用中，这两种技术是相互补充的。
综上所述，液相色谱具有柱效高，选择性高，灵敏性高，分析速度快，重复性好，应用范围广等优点，该法已成为现代分析技术的主要手段之一。目前在化学，化工，医药，生化，环保，农业等科学领域获得广泛的应用 [2] 。
高效液相色谱法介绍
基本原理
高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，是在经典液相色谱法的基础上，于20世纪60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀。因为较小的填充颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。
使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛地应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。
高效液相色谱仪的构造
高效液相色谱系统主要由流动相储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录仪组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。高效液相色谱的输液泵要求输液量恒定平稳，进样系统要求进样便利、切换严密。同时，由于液体流动相黏度远远高于气体，为了减低柱压，高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。图3所示为高效液相色谱仪的结构示意图。
