采用干法授精,先把准备好的雄鱼、雌鱼分开,分别放在装有水的收纳箱里(水深20 cm),先把雄鱼取出用干毛巾抹干体表水分,轻按腹部,流出时用2 m L吸管吸入,然后挤入小量杯中,加入0.9%生理盐水和10%葡萄糖溶液各10 m L,轻轻摇晃均匀,备用。再用干毛巾抹干雌鱼体表的水分,用手按住雌鱼腹部从上而下挤卵,使鱼卵顺利排出、排空,鱼卵用搪瓷盆或白瓷碗接住,同时倒入,并轻轻晃动搪瓷盆或用羽毛轻轻搅动鱼卵,加入适量清水,用羽毛搅拌均匀,静置2~3 min,使鱼卵充分授精;再用清水漂洗受精卵3~4次,放入孵化框中采用淋水孵化(孵化密度为8 000~10 000粒/㎡),大刺鳅受精卵为黄色,是沉性卵,并且具有黏性。(也可以选择:采用湿法授精,具体步骤:使用适量鱼将大刺鳅亲鱼麻醉,用毛巾将雌性亲鱼鱼体上的水分擦拭后挤卵,从腹部前端往生殖孔方向将卵子挤于消毒好的不锈钢盆中。雄性亲鱼挤精方法类似,再利用注射器吸取挤出的,注入装有生理盐水的不锈钢盆中,混匀后倒入放有卵子的不锈钢盆中,并用另一个不锈钢盆反复倾倒以充分混匀,完成授精,后将受精卵均匀倒入准备好的孵化器、孵化池中进行孵化。孵化过程中水温保持在2829℃之间,孵化池水体的溶解氧应始终保持在5~mg/L以上,池水pH值在7.2~7.8之间。)