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关 键 词：药物微生物指标检测
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发布时间：2024-07-17
病毒是一种个体微小，结构简单，只含一种核酸(DNA或RNA)，必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。病毒灭活试验是利用某种有代表性的活病毒及其细胞感染技术，评价各种消毒因子的病毒杀灭效果，验证消毒因子的病毒灭活能力。
病毒灭活试验病毒悬液的制备：
1、从液氮中取出冻存的试验用宿主细胞，在37°C温水中迅速融化，用毛细吸管移植于含有细胞维持液的细胞管内，吹吸数次，使混匀,立即离心(3000r/min， 3min) ，去上清液。再加入适当的细胞维持液，吹吸数次，使混匀，同上离心后，转种于加有10完全培养基的培养瓶中。逐日观察细胞生长情况，在细胞长满单层时，用于消毒试验。
2、取出低温冻存的试验病毒毒种，37°C水浴融化，用细胞维持液作10倍稀释，然后接种于已经长满单层细胞的细胞瓶内，置37°C温箱中，使与细胞吸附、生长。逐日观察病变，待3/4细胞出现病变时，收获病毒。
3、将含有病毒及宿主细胞的培养液，在冰浴条件下，用超声波(或反复冻融)破碎宿主细胞，释放病毒。然后，尽快离心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要为细胞碎片)，上清液即为所需的病毒悬液。按每管1. 0分装于无菌离心管(1.5)中。
4、取1支病毒悬液，按病毒滴度测定法，测定其病毒滴度。其余均冷冻保存于-80°C备用。
病毒灭活的机理有三:
1、破坏包膜：
包膜含有脂类物质，因之有包膜的病毒可迅速被脂溶剂破坏，如、氯仿或去氧胆酸钠可使病毒灭活。实际上可利用病毒对脂溶剂的敏感性来检查病毒是否有包膜。物理因子，如渗透压改变、冻融、热和干燥等都可引起包膜破坏。一般认为，呼吸道感染的病毒对于燥抵抗力弱，传播主要是人间直接感染，这是因为有包膜的原故。
2、病毒蛋白质变性：
能使蛋白质变性的化学制剂都能使病毒灭活，如酚、次氯化物、酸和碱等。加热引起变性也是有效灭活的方法。一般说病毒对热抵抗力弱，60°C几分钟就使之感染性明显降低，因此在分离病毒时，从患者取来的标本需低温保存，迅速送往实验室，长期保存置于-80°C以下的低温条件。
3、病毒核酸的损害：
y线等电离可切断核酸，紫外线可使核苷酸链上相邻的嘧啶碱基形成二聚物，而破坏病毒基因的功能。另外吖啶橙或中性红等染料可与病毒核酸结合，暴露于光线之下，可使核酸分解，而使病莓灭活。
病毒灭活效果测试：
主要适用于消毒产品鉴定或日常监测。用具有一定代表性的、活的病毒及其细胞感染技术，评价各种用途的消毒因子对测试病毒的杀灭效果。病毒杀灭效果试验，主要适用于消毒产品鉴定或日常监测。用具有一定代表性的、活的病毒及其细胞感染技术，评价各种用途的消毒因子对测试病毒的杀灭效果。
病毒灭活是指用物理或化学手段杀死病毒，但是不损害它们体内有用抗原的方法。灭活病毒，会使病容毒蛋白的结构受到破坏，蛋白不再有生理活性，所以失去感染，致病和繁殖能力，但是常规的灭活不影响病毒蛋白的一级结构，意思就是病毒蛋白的序列没有变化。*系统对抗原的识别分成两种，一种是构像表位，一种是线性表位。构象表位意思就是蛋白的三维结构，而线性表位就是蛋白的序列一级结构。T细胞只需要识别线性表位就成接受*呈递细胞给出的信号，引发*反应。所以灭活的病毒具有抗原性，但失去感染力。这个其实是很多疫苗的制造原理。灭活的病毒失去感染活性，但仍有融合活性。用于动物细胞工程中的细胞融合的诱导剂。
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