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上海宝予德科学仪器有限公司
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宝予德K3 Plus酶标仪光学系统包括以下部件:光源:光源为装有镀铝椭圆反射器的石英卤钨灯(Osram 64607A,8V/50W)。为了延长灯具的使用寿命,不使用时请关闭仪器。开始测量前,必须先预热一(1)分钟。斩光轮:斩光轮截断光束,以尽可能减少电子噪音。半透明镜:光束穿过聚光透镜后照射到半透明镜上。部分可见光与所有长波长均穿过镜片及UV,而剩下的可见光反射到其它地方。此装置能够减少干涉滤光片的发热,并使光谱强度分布均匀。干涉滤光片:滤光片轮的一到八(1到8)个滤光片中选择波长。光纤束:穿过干涉滤光片后,光束到达光纤束的端点,光束折射为八(8)束平行向上的光线。聚焦透镜:经折射后,光线穿过由八(8)个透镜组成的聚焦系统。检测器:光束经孔板底部,样品及上部透镜,***进入检测器,由检测器测量光的强度。滤光片式酶标仪采用滤光片来进行波长的选择。浙江酶标仪Elisa实验
TMB的氧化产物联苯醌在波长450nm处有比较大消光系数,如果HRP量少,H:O:和TMB过量时,则形成蓝色的阳离子根。降低pH,即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌,使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min。因此,450nm和492 nm两个波长是目前ELISA测定常用的。各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件,可以同时安装6~8片滤光片,所配备的滤光片均应包括上述两个波长,有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm滤光片,影响不大。除了这两个基本滤光片外,考虑到双波长比色的需要,还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片,其他滤光片可根据自己的需要选择。有时,有的实验室希望用酶标仪作微量生化测定,故酶标仪生产厂家对其生产的酶标仪扩展了紫外检测功能,此时需要一个340 nm波长滤光片。此时,酶标仪的测定波长范围就成为340—750nm或800nm。江苏性能稳定酶标仪酶联*可见光和紫外光酶标仪分别采用钨灯及氘灯作为光源。
OD值由下述公式计算:c为检测物的浓度 b为检测物的厚度 a为摩尔因子在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。
光栅式酶标仪虽然才出现短短十余年,但是发展非常迅猛,已经是主流的酶标仪.它采用光栅进行分光,光源发出的全波谱光线经过光栅后,通过光栅上面分布的一系列狭缝的分光,就可以获得任意波长的光,波长连续可调,一般递增量为1nm,同时具有带宽可选的功能。光栅式酶标仪使用方便灵活,可以通过软件选择任意波长的光,而且可以进行全波长的扫描,通过全波长扫描可以获得未知样品的吸收峰,从而可以达到检测未知样品的目的,在实验室中很受欢迎,可以进行更多实验的检测,因此在国内的普及程度很高。根据通道的个数,可以将酶标仪分为单通道和多通道两种类型。
双波长检测的原理:在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。一般来说在ELISA操作中出现的黄颜色溶液,在450nm波长下会有比较大的吸收值。但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。在ELISA酶标仪中一般采用比较长作为参照波长,以消除非特异性吸收以及底部的指纹等其他干扰。所以在做现代ELISA实验时,比较好能选择双波长进行读数,可比较大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差,以保证实验数据的准确性。波长100-400nm称为紫外光,400-780nm之间的光称为可见光,大于780nm称为红外光。甘肃检测快速酶标仪波长范围广
酶标仪可以分为光吸收酶标仪,荧光酶标仪,化学发光酶标仪和多功能的酶标仪。浙江酶标仪Elisa实验